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一种壳聚糖固定化碳九芳烃降解菌的制备方法及应用 

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申请/专利权人:黎明职业大学

摘要:本发明公开一种壳聚糖固定化碳九芳烃降解菌的制备方法及应用,以受污染海域筛选得到的高效碳九芳烃降解菌作为菌种来源,以壳聚糖为载体制备得到壳聚糖固定化碳九芳烃降解菌,用以改善游离微生物降解不稳定的缺陷,并应用于对碳九芳烃的降解。

主权项:1.一种壳聚糖固定化碳九芳烃降解菌的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:步骤1、先取受污染海域的海水,筛选出碳九芳烃降解菌菌种;步骤2、然后将实验室筛选获得的碳九芳烃降解菌菌种于LB液体培养基活化后,取5mL菌液加入到95mL碳九芳烃培养基中,放入恒温摇床,在25~30℃下、150rmin震荡培养3~5天,接着取培养好的100mL菌液放入离心管中,放入低温离心机中,在3000rmin下离心5~10min后,取出离心管去掉上清液,得到的下层菌体沉淀物用无菌生理盐水混匀制备成碳九芳烃降解菌菌悬液,于4℃冰箱中保存备用;步骤3、然后称取3g壳聚糖粉末,加入一定量的1%乙酸溶液搅拌,直至溶液均一透明,得到壳聚糖乙酸溶解液;步骤4、然后取无水乙醇与配置好的0.05gmLNaOH溶液,按照1:3~5的体积比混匀,用注射器取步骤3的壳聚糖乙酸溶解液缓慢滴入,固化5~8h,得到壳聚糖载体小球;步骤5、然后取壳聚糖载体小球与配置好的体积分数为3%戊二醛溶液,按照质量:体积=1:2~4的比例混匀,得到交联溶液,在35~45℃下进行壳聚糖与戊二醛的交联反应,反应3~5h;步骤6、然后将碳九芳烃降解菌菌悬液用振荡器混合均匀后,加入到步骤5的交联溶液中固化5~8h,得到壳聚糖固定化碳九芳烃降解菌,用磷酸盐缓冲液清洗干净表面后,于4℃冰箱中保存备用。

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权利要求:

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