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申请/专利权人：福建师范大学

摘要：本发明公开了一种用于全细胞催化制备β‑烟酰胺单核苷酸的重组菌及其构建方法和应用；采用该方法将核糖‑1‑激酶、嘌呤核苷磷酸化酶、烟酰胺核糖激酶及聚磷酸激酶通过表达载体导入到大肠杆菌突变株K12△aphA△nadR△rihC中构建的重组菌KN‑01，通过弱化NMN的消耗途径和烟酰胺核糖的降解途径，以及NMN的合成逆反应，有效地提高了NMN的产量和底物NR的转化效率，KN01菌株组NMN的产量最高，烟酰胺核糖的转化率最高；以浓度为0.2M的核糖烟酰胺为底物，KN01菌株的转化率均在95％以上，产量均大于65gL，底物残留量低，便于下游结晶精制；采用本发明的方法构建的基因工程菌生产NMN，具有原料低廉，工艺简单，生产效率高等优点，具有良好的工业化应用前景。

主权项：1.一种用于全细胞催化制备β-烟酰胺单核苷酸的重组菌的构建方法，其特征在于，将核糖-1-激酶、嘌呤核苷磷酸化酶、烟酰胺核糖激酶以及聚磷酸激酶的编码基因通过重组载体导入受体菌进行诱导表达，进而得到用于全细胞催化制备β-烟酰胺单核苷酸的重组菌；其中，所述核糖-1-激酶来源为智人、酿酒酵母或克雷伯氏菌中的一种，来源为克雷伯氏菌的所述核糖-1-激酶的氨基酸序列为SEQIDNO.1所示，来源为智人的所述核糖-1-激酶的氨基酸序列为SEQIDNO.2，来源为酿酒酵母的所述核糖-1-激酶的氨基酸序列为SEQIDNO.3；所述嘌呤核苷磷酸化酶来源为家鼠，来源为家鼠的所述嘌呤核苷磷酸化酶的氨基酸序列为SEQIDNO.4；所述烟酰胺核糖激酶来源为智人，来源为智人的所述烟酰胺核糖激酶的氨基酸序列为SEQIDNO.5；所述聚磷酸激酶来源为斯氏马里杆菌或耐辐射球菌中的一种，来源为斯氏马里杆菌的所述聚磷酸激酶氨基酸序列为SEQIDNO.6；来源为耐辐射球菌的所述聚磷酸激酶氨基酸序列为SEQIDNO.8；所述受体菌为突变型大肠杆菌或野生型大肠杆菌；其中，所述突变型大肠杆菌为下述B1至B7中的任一种：b1、将磷酸转移酶基因敲除；b2、将腺苷酸转移酶基因敲除；b3、将核糖核苷水解酶基因敲除；B1、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b1-b3改造得到的野生型大肠杆菌的突变体；B2、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b1改造得到的野生型大肠杆菌的突变体；B3、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b2改造得到的野生型大肠杆菌的突变体；B4、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b1和b2改造得到的野生型大肠杆菌的突变体；B5、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b3改造得到的野生型大肠杆菌的突变体；B6、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b1和b3改造得到的野生型大肠杆菌的突变体；B7、所述突变型大肠杆菌为对所述野生型大肠杆菌进行上述b2和b3改造得到的野生型大肠杆菌的突变体。

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