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申请/专利权人：淮安浩华生物有限公司

摘要：本发明涉及一种核辐射诱变法制备维生素k2菌株的方法，包括如下步骤：步骤一、取黄杆菌HNA12‑D接种在斜面培养基内，用剂量为400‑1200Gy的γ射线对培养基内的黄杆菌进行辐射30‑90min，剂量率为15‑30Gymin；步骤二、将装有黄杆菌的培养基放入光照培养箱内，进行20‑60天的恢复培养，将光照培养箱的温度控制在20‑30℃；步骤三、将经过辐射处理的黄杆菌接种在三角细胞摇瓶中，对接种后的黄杆菌进行放大培养，放大培养完成之后，将黄杆菌以4000‑5000rpm离心处理10‑15min。本发明采用核辐射诱变法进行维生素k2菌种进行培养，能够诱发维生素k2菌种出现染色体结构和数目上的变异，促成易位系及非速倍体的发生，可促成原生质体非对称细胞融合，提高外源基因整合程度，提高转化效率。

主权项：1.一种核辐射诱变法制备维生素k2菌株的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、取黄杆菌HNA12-D接种在斜面培养基内，用剂量为400-1200Gy的γ射线对培养基内的黄杆菌进行辐射30-90min，剂量率为15-30Gymin；步骤二、将装有黄杆菌的培养基放入光照培养箱内，进行20-60天的恢复培养，将光照培养箱的温度控制在20-30℃；步骤三、将经过辐射处理的黄杆菌接种在三角细胞摇瓶中，对接种后的黄杆菌进行放大培养，放大培养完成之后，将黄杆菌以4000-5000rpm离心处理10-15min，取出上浮的清液，下层沉淀作为黄杆菌菌种；步骤四、以核辐射诱变后的黄杆菌菌种为出发菌种，将黄杆菌培养在平板培养基A中，培养温度为35-40℃，培养时间为2-5天；步骤五、将活化好的黄杆菌菌种采用生理盐水稀释90倍，菌液中菌体浓度保持在每毫升含100-120个细胞，将平皿放入低能离子注入机的靶室中进行N+注入，注入能量为15kev，剂量为2.0×1015N+cm2；步骤六、以真空环境下未接受离子注入的样品作为对照；离子注入辐照后，在超净工作台上用1mL无菌生理盐水分别洗脱处理样品和对照样品，将洗脱得到的菌液用微量移液器分别取0.1mL菌液均匀涂布在初筛平板培养基B上培养；步骤七、待长出单菌落后进行菌落计数并挑取生长速度快，直径大的菌落，接入发酵培养基B上摇瓶发酵，得到维生素k2菌株。

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