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申请/专利权人：长江大学

摘要：本发明涉及一种检测方法，具体涉及一种检测豇豆中残留有机磷类农药的方法。该检测方法基于CDs‑MnO2NSs，结合AChE催化活性和有机磷农药对酶的不可逆抑制作用检测豇豆中有机磷农药残留。MnO2NSs可有效猝灭CDs的荧光，残留的MnO2NSs可催化TMB显色。TCh在AChE催化下由ATch生成，当有机磷农药不存在时，TCh可还原MnO2NSs成Mn2+，使MnO2NSs失去荧光猝灭能力，CDs恢复荧光；在有机磷农药存在时，AChE的活性被抑制，TCh的产生受阻，阻止MnO2NSs的分解，使CDs产生荧光。在检测过程中AChE抑制率与有机磷农药浓度的对数呈线性关系，能达到对目标物质的定量分析；其中，MnO2具有类酶活性，能使TMB显色，进而得以验证。该检测方法旨在为建立快速检测有机磷农药残留提供新的方法，以期保证豇豆的食用安全。

主权项：1.一种检测豇豆中残留有机磷类农药的方法，其特征在于：它包括以下步骤：1）、准备以下试剂和药品：柠檬酸，乙二胺，高锰酸钾，氯化钾，氯化钠，氯化镁，乙酸，乙酸钠，甲醇，MES，Tris-HCl，ATch，AChE，TMB；2）、称取500（重量份）柠檬酸于烧杯中，混入899（重量份）乙二胺，再加入20000（重量份）超纯水，室温搅拌均匀；将其转入水热反应釜中，以180℃温度反应6h；反应结束后，用透析袋和超纯水透析48h除去未反应的有机分子杂质，超纯水一天换两次，透析完成之后，得CDs溶液；将CDs溶液冷冻干燥并储存在4℃下备用；3）、取300（体积份）CDs溶液与1250（体积份）0.1molL、pH=6.0的MES缓冲溶液混合，加入500（体积份）10mmolL的高锰酸钾溶液，用超纯水将反应液体积调整为5000（体积份）；超声振荡30min后，反应液转换成棕色；反应结束后，反应液在10000rpm下离心5min，弃去上清液，用超纯水洗涤棕色沉淀物后，于10000rpm下离心5min；重复洗涤三次后制得CDs-MnO2NSs，备用；4）、将豇豆样品粉碎，称取10g样品加入到50mL甲醇中溶解，超声处理30min；将超声后的样品混合物离心后取出上清液，得样品提取液；5）、将25（体积份）100mUmL的AChE与25（体积份）样品提取液混匀，短暂离心后，在4-45℃温度条件下于恒温加热磁力搅拌器中300rpm避光反应10-50min；加入25（体积份）2mmolLATch，25（体积份）100mmolL、pH值6.5-9的Tris-HCl缓冲液混匀，离心后再反应25min；反应后，加入50（体积份）的CDs-MnO2NSs、25（体积份）Tris-HCl缓冲液和350（体积份）超纯水混匀，离心后再反应15min，得检测液；6）、根据检测液的荧光变化判断样品提取液中是否存在有机磷农药，通过荧光光谱仪测定的荧光强度换算有机磷农药的残留量；7）、取检测液1000（体积份），加入1000（体积份）0.25mM的TMB混合，在4-45℃温度下反应1-15min后，用紫外-可见分光光度计测定649nm处的吸光度，对检测液中MnO2NSs的含量进行检测，进而对有机磷农药的残留进行验证。

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百度查询： 长江大学 一种检测豇豆中残留有机磷类农药的方法