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申请/专利权人:湖北师范大学
摘要:本发明涉及生物技术领域,公开了SPI对红曲菌产MPs和MK的调控机制的分析方法,包括以下步骤,步骤一,红曲菌发酵样品前处理,步骤二,红曲菌发酵液和菌丝体中代谢物的提取,步骤三,红曲菌发酵代谢物的LC‑MSMS分析,步骤四,数据预处理及统计分析,步骤五,对筛选的差异代谢物绘制层次聚类热图,最后进行差异代谢物KEGG功能注释及富集分析代谢通路。本发明具有以下优点和效果:本发明通过对红曲菌发酵样品前处理和代谢物提取,利用液质联用系统进行分析和MassLynxV4.2采集原始数据,对数据预处理和分析后,筛选出差异代谢物,完成SPI对红曲菌产MPs和MK的调控机制的科学分析,为产业应用中提高产量提供技术支持。
主权项:1.SPI对红曲菌产MPs和MK的调控机制的分析方法,其特征在于:包括以下步骤,步骤一,红曲菌发酵样品前处理,红曲菌接种于含SPI的合成培养基,培养后分离发酵液和菌丝体,发酵液离心后取上清于样品管中,迅速放入液氮中淬灭,菌丝体用生理盐水冲洗之后置于样品管中迅速放入液氮中淬灭;步骤二,红曲菌发酵液和菌丝体中代谢物的提取,分别提取红曲菌发酵液和菌丝体代谢物,将两者混合;步骤三,红曲菌发酵代谢物的LC-MSMS分析,对混合后的样本进行LC-MSMS分析;步骤四,数据预处理及统计分析,对采集的原始数据进行数据处理操作,再整合得到代谢组数据,完成代谢物的定性和定量分析,代谢物定性定量后,进行数据质量评估、注释分析、差异表达分析和功能富集等。使用无监督主成分分析初步了解各组样本之间的总体代谢差异和组内样本之间的变异度大小。再结合偏最小二乘判别分析并计算其R2Y和Q2Y检验模型的可靠性;步骤五,基于偏最小二乘判别分析结果,从获得的多变量分析OPLS-DA模型的变量重要性投影,初步筛选出不同样品间差异的代谢物。同时结合单变量分析的p-value或者差异倍数值筛选差异代谢物,根据差异倍数值≥1,变量重要性投影≥1和pvalue0.05筛选差异代谢物;对筛选的差异代谢物,通过火山图分析代谢物在两个组中含量的差异总体趋势以及代谢物差异的统计学显著性,并对筛选的差异代谢物绘制层次聚类热图,最后进行差异代谢物KEGG功能注释及富集分析代谢通路。
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权利要求:
百度查询: 湖北师范大学 SPI对红曲菌产MPs和MK的调控机制的分析方法
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