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申请/专利权人：东北农业大学
摘要：本发明公开了一种CHO‑S细胞的超大分子透明质酸的制备方法及其应用，其中制备方法包括：将nmrHas2基因插入到pMD18T克隆载体中形成pMD18T‑nmrHas2；利用pMD18T‑nmrHas2以及pCApuro表达载体构建pCApuro‑nmrHas2；利用pCApuro‑nmrHas2转染CHO‑S细胞；利用培养板培养转染的转染CHO‑S细胞，根据透明质酸表达量、孔内细胞数、检测干扰、细胞形态以及培养板位置筛选表达nmrHas2基因的细胞，经检测得到过表达nmrHas2基因的CHO‑S克隆细胞；收集培养30天过表达nmrHas2基因的CHO‑S克隆细胞的细胞培养基，对细胞培养基离心处理，对细胞培养基上清中的透明质酸进行分离纯化，最终获得高纯度的超大分子透明质酸。本发明通过CHO细胞的超大分子透明质酸的制备方法获得能够应用于治疗癌症药物的超大分子透明质酸，具有产量高、纯度高、分子量可控等显著的优势。
主权项：1.CHO-S细胞的超大分子透明质酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤a：根据nmrHas2蛋白质序列设计nmrHas2基因；nmrHas2基因的基因序列如SEQIDNO.2所示；步骤b：将nmrHas2基因片段插入到pMD18T克隆载体中形成pMD18T-nmrHas2；步骤c：利用pMD18T-nmrHas2以及pCApuro表达载体构建pCApuro-nmrHas2；步骤d：利用pCApuro-nmrHas2转染CHO-S细胞；步骤e：利用培养板培养转染CHO-S细胞，根据透明质酸表达量、孔内细胞数、检测干扰、细胞形态以及培养板位置筛选出表达nmrHas2基因的CHO-S细胞，经检测得到过表达nmrHas2基因的CHO-S细胞克隆株；步骤f：收集过表达nmrHas2基因的CHO-S细胞的细胞培养基，对细胞培养基离心处理，并对离心上清液中的透明质酸进行分离纯化，最终获得高纯度的超大分子透明质酸。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 东北农业大学 一种CHO-S细胞的超大分子透明质酸的制备方法及其应用
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