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申请/专利权人：福建师范大学

摘要：本发明公开了一种基于表面增强拉曼技术检测透明质酸酶的方法，包括以下步骤：S1：AuNPs溶液的制备；S2：Au@4‑MPBA@HANPs溶液的制备；S3：Fe3O4@DTNB@Au@MEA基底的制备；S4：“Au@4‑MPBA@HAFe3O4@DTNB@Au@MEA”复合物溶液的制备；S5：透明质酸酶HAase的检测。本发明具有高特异性、高灵敏度和高抗干扰性，能够快速、灵敏地检测出透明质酸酶HAase在肿瘤微环境中的表达和活性。

主权项：1.一种基于表面增强拉曼技术检测透明质酸酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：AuNPs溶液的制备：在强烈搅拌条件下，将1％wt的Nact溶液和0.01％wt的氯金酸沸腾水溶液以体积比1:50混合；当溶液再次沸腾后继续加热搅拌15分钟，得到呈酒红色的AuNPs溶液；S2：Au@4-MPBA@HANPs溶液的制备：将纯化后的AuNPs溶液与1mM的4-巯基苯硼酸溶液以体积比200:1-100:1混合，孵化2h后，转速8500rpm离心12min并重悬于蒸馏水中；将1mgmL的透明质酸溶液以体积比20:1-10:1加入重悬后的溶液中，搅拌2h，得到Au@4-MPBA@HANPs溶液；S3：Fe3O4@DTNB@Au@MEA基底的制备：将1g的Fe3O4经过1mgmL的PEI处理后与金种子溶液一起孵育30min，得到的Fe3O4@Au-seedNPs溶液；将Fe3O4@Au-seedNPs溶液利用磁铁分离并洗涤重悬后再与0.1mM的DTNB以体积比80:1-120:1混合孵育30min；孵育后再次利用磁铁分离并洗涤，并重悬在去离子水中得到Fe3O4@Au-seed@DTNBNPs溶液，将其放置于3mgmL的PVP和0.5mgmL的盐酸羟胺混合溶液中，前者与后者的体积比为1:15-1:20，超声15min，然后向其中加入100-500μL的1％wt的氯金酸溶液超声15min；S4：Au@4-MPBA@HAFe3O4@DTNB@Au@MEA复合物溶液的制备：将S2制得的Au@4-MPBA@HANPs溶液中透明质酸表面羧基活化后，与S3制得的Fe3O4@DTNB@Au@MEA基底溶液孵育2h，得到Au@4-MPBA@HAFe3O4@DTNB@Au@MEA复合物溶液A，复合物溶液A利用磁铁分离并洗涤重悬后，与5％wt的牛血清白蛋白以体积比10:1混合并孵育1h，得到Au@4-MPBA@HAFe3O4@DTNB@Au@MEA复合物溶液；S5：HAase的检测。

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