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申请/专利权人：徐州医科大学

摘要：本发明公开了一种同时检测MALAT1和HOTAIR的荧光‑电化学双模态传感器，其包括：MBs‑DNA探针偶联物、燃料链M‑F和H‑F、M‑S1S2S3三链体、H‑S1S2S3三链体、修饰捕获探针的纸基电极，本发明还公开了MBs‑DNA探针偶联物和修饰捕获探针的纸基电极的制备方法。本发明的荧光‑电化学双模态传感器可用于体外同时检测MALAT1和HOTAIR，与现有技术相比，灵敏度较高，特异性好，检测成本可控，操作简便，不仅能够同时检测MALAT1和HOTAIR，还能够利用荧光和电化学的双响应模式，降低检测结果的假阳性，提高数据的准确度。

主权项：1.一种同时检测MALAT1和HOTAIR的荧光-电化学双模态传感器，其特征在于，所述荧光-电化学双模态传感器包括：MBs-DNA探针偶联物、燃料链M-F和H-F、M-S1S2S3三链体、H-S1S2S3三链体、修饰捕获探针的纸基电极；所述燃料链M-F的核苷酸序列：5'-GCTACTACCTACGTCTCCACCCTCCAGCCTGTTCA-3'；所述燃料链H-F的核苷酸序列：5'-GCTAGCACCGCGTATACCTGGCCACCACTAGCA-3'；所述M-S1S2S3三链体的制备方法：将M-S1、M-S2、M-S3按1：1：1的体积比混合后，金属浴95℃避光孵育5min，反应结束后，冷却至室温，即得；所述H-S1S2S3三链体的制备方法：将H-S1、H-S2、H-S3按1：1：1的体积比混合后，金属浴95℃避光孵育5min，反应结束后，冷却至室温，即得；所述M-S1的核苷酸序列：5'-FAM-ATAGTGTGTGAACAGGCTGGAGGGTGGAGACGTAGGTAGTAGC-3'；所述M-S2的核苷酸序列：5'-CCCTCCAGCCTGTTCA-BHQ1-3'；所述M-S3的核苷酸序列：5'-MB-GCTACTACCTACGTCTCCA-3'；所述H-S1的核苷酸序列：5'-Cy3-ATACTCTGTGCTAGTGGTGGCCAGGTATACGCGGTGCTAGCTC-3'；所述H-S2的核苷酸序列：5'-CTGGCCACCACTAGCA-BHQ2-3'；所述H-S3的核苷酸序列：5'-Fc-GAGCTAGCACCGCGTATAC-3'；所述MBs-DNA探针偶联物的制备方法，包括如下步骤：1根据LncRNAMALAT1的序列，设计M-Walker、M-Blocker和发夹探针M，将M-Walker和M-Blocker混合后杂交反应，获得双链体，再将双链体和发夹探针M混合，得到LncRNAMALAT1的DNA酶反应体系；2根据LncRNAHOTAIR的序列，设计H-Walker、H-Blocker和发夹探针H，将H-Walker和H-Blocker混合后杂交反应，获得双链体，再将双链体和发夹探针H混合，得到LncRNAHOTAIR的DNA酶反应体系；3将LncRNAMALAT1的DNA酶反应体系、LncRNAHOTAIR的DNA酶反应体系和链霉亲和素偶联磁珠溶液在室温下混合，孵育后洗涤，得到MBs-DNA探针偶联物；所述修饰捕获探针的纸基电极的制备方法：将SiO2-Au溶液均匀地滴在纸基电极的工作区域，待干燥后，用Tris-HCl缓冲液反复洗涤，去除未结合的SiO2-Au，备用；将巯基修饰的捕获探针M和捕获探针H分别与1mMTCEP-HCl按1：100的摩尔比混合，室温孵育30min以还原寡核苷酸上的二硫键，反应完成后，再将捕获探针M和捕获探针H分别滴涂在纸基电极的两个工作区域，4℃冰箱过夜进行自组装，孵育结束后用Tris缓冲液洗涤，然后滴加BSA封闭液，封闭1h，再用Tris缓冲液反复冲洗，待纸基电极干燥后，即得修饰捕获探针的纸基电极；所述捕获探针M的核苷酸序列：5'-SH-TTTTTTGGAGACGTAGGTAGTAGC-3'；所述捕获探针H的核苷酸序列：5'-SH-TTTTTGTATACGCGGTGCTAGCTC-3'。

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