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一种同时检测MALAT1和HOTAIR的荧光-电化学双模态传感器及其应用 

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申请/专利权人:徐州医科大学

摘要:本发明公开了一种同时检测MALAT1和HOTAIR的荧光‑电化学双模态传感器,其包括:MBs‑DNA探针偶联物、燃料链M‑F和H‑F、M‑S1S2S3三链体、H‑S1S2S3三链体、修饰捕获探针的纸基电极,本发明还公开了MBs‑DNA探针偶联物和修饰捕获探针的纸基电极的制备方法。本发明的荧光‑电化学双模态传感器可用于体外同时检测MALAT1和HOTAIR,与现有技术相比,灵敏度较高,特异性好,检测成本可控,操作简便,不仅能够同时检测MALAT1和HOTAIR,还能够利用荧光和电化学的双响应模式,降低检测结果的假阳性,提高数据的准确度。

主权项:1.一种同时检测MALAT1和HOTAIR的荧光-电化学双模态传感器,其特征在于,所述荧光-电化学双模态传感器包括:MBs-DNA探针偶联物、燃料链M-F和H-F、M-S1S2S3三链体、H-S1S2S3三链体、修饰捕获探针的纸基电极;所述燃料链M-F的核苷酸序列:5'-GCTACTACCTACGTCTCCACCCTCCAGCCTGTTCA-3';所述燃料链H-F的核苷酸序列:5'-GCTAGCACCGCGTATACCTGGCCACCACTAGCA-3';所述M-S1S2S3三链体的制备方法:将M-S1、M-S2、M-S3按1:1:1的体积比混合后,金属浴95℃避光孵育5min,反应结束后,冷却至室温,即得;所述H-S1S2S3三链体的制备方法:将H-S1、H-S2、H-S3按1:1:1的体积比混合后,金属浴95℃避光孵育5min,反应结束后,冷却至室温,即得;所述M-S1的核苷酸序列:5'-FAM-ATAGTGTGTGAACAGGCTGGAGGGTGGAGACGTAGGTAGTAGC-3';所述M-S2的核苷酸序列:5'-CCCTCCAGCCTGTTCA-BHQ1-3';所述M-S3的核苷酸序列:5'-MB-GCTACTACCTACGTCTCCA-3';所述H-S1的核苷酸序列:5'-Cy3-ATACTCTGTGCTAGTGGTGGCCAGGTATACGCGGTGCTAGCTC-3';所述H-S2的核苷酸序列:5'-CTGGCCACCACTAGCA-BHQ2-3';所述H-S3的核苷酸序列:5'-Fc-GAGCTAGCACCGCGTATAC-3';所述MBs-DNA探针偶联物的制备方法,包括如下步骤:1根据LncRNAMALAT1的序列,设计M-Walker、M-Blocker和发夹探针M,将M-Walker和M-Blocker混合后杂交反应,获得双链体,再将双链体和发夹探针M混合,得到LncRNAMALAT1的DNA酶反应体系;2根据LncRNAHOTAIR的序列,设计H-Walker、H-Blocker和发夹探针H,将H-Walker和H-Blocker混合后杂交反应,获得双链体,再将双链体和发夹探针H混合,得到LncRNAHOTAIR的DNA酶反应体系;3将LncRNAMALAT1的DNA酶反应体系、LncRNAHOTAIR的DNA酶反应体系和链霉亲和素偶联磁珠溶液在室温下混合,孵育后洗涤,得到MBs-DNA探针偶联物;所述修饰捕获探针的纸基电极的制备方法:将SiO2-Au溶液均匀地滴在纸基电极的工作区域,待干燥后,用Tris-HCl缓冲液反复洗涤,去除未结合的SiO2-Au,备用;将巯基修饰的捕获探针M和捕获探针H分别与1mMTCEP-HCl按1:100的摩尔比混合,室温孵育30min以还原寡核苷酸上的二硫键,反应完成后,再将捕获探针M和捕获探针H分别滴涂在纸基电极的两个工作区域,4℃冰箱过夜进行自组装,孵育结束后用Tris缓冲液洗涤,然后滴加BSA封闭液,封闭1h,再用Tris缓冲液反复冲洗,待纸基电极干燥后,即得修饰捕获探针的纸基电极;所述捕获探针M的核苷酸序列:5'-SH-TTTTTTGGAGACGTAGGTAGTAGC-3';所述捕获探针H的核苷酸序列:5'-SH-TTTTTGTATACGCGGTGCTAGCTC-3'。

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