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一种提高褐藻胶裂解酶热稳定性的方法及其应用 

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申请/专利权人:江南大学

摘要:本发明公开了一种提高褐藻胶裂解酶热稳定性的方法及其应用,属于基因工程和酶工程技术领域。本发明提供了一系列褐藻胶裂解酶突变体,其最适反应温度均提高10℃,单一突变体表观熔融温度提高了1.01‑11.24℃,相对酶活为野生酶的96.09%‑112.32%,半衰期为野生酶的1.01‑1.66倍。最佳组合突变体表观熔融温度提高17.05℃,相对酶活为野生酶的123.93%,半衰期为野生酶的8.21倍,45℃下孵育6h后仍能保留79.69%原始酶活,而野生酶在相同条件下孵育3h后失活。突变体与野生酶相比显示出优越的耐热性,能在较高温度下进行工业化生产,从而提高褐藻胶的利用率,具有良好的工业应用前景。

主权项:1.一种褐藻胶裂解酶突变体,其特征在于,所述褐藻胶裂解酶突变体对氨基酸序列如SEQIDNO.4所示的序列进行了如下任一种突变:(1)第34位丙氨酸突变为脯氨酸;(2)第34位丙氨酸突变为脯氨酸,并且第73位天冬酰胺突变为甘氨酸;(3)第34位丙氨酸突变为脯氨酸,并且第94位亮氨酸酸突变为苯丙氨酸;(4)第34位丙氨酸突变为脯氨酸,并且第137位天冬酰胺突变为酪氨酸;(5)第34位丙氨酸突变为脯氨酸,并且第161位甲硫氨酸突变为异亮氨酸;(6)第34位丙氨酸突变为脯氨酸,第94位亮氨酸酸突变为苯丙氨酸,并且第161位甲硫氨酸突变为异亮氨酸;(7)第34位丙氨酸突变为脯氨酸,第137位天冬酰胺突变为酪氨酸,并且第161位甲硫氨酸突变为异亮氨酸;(8)第34位丙氨酸突变为脯氨酸,第94位亮氨酸酸突变为苯丙氨酸,第137位天冬酰胺突变为酪氨酸,并且第161位甲硫氨酸突变为异亮氨酸。

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