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申请/专利权人：北京智飞绿竹生物制药有限公司;重庆智飞生物制品股份有限公司;安徽智飞龙科马生物制药有限公司
摘要：本发明属于预防用生物制品生产领域，具体涉及一种低聚合破伤风类毒素的制备方法。本发明的制备方法，包括以下步骤：步聚一：破伤风毒素二段盐析纯化；步聚二：破伤风毒素层析纯化；步聚三：破伤风毒素脱毒。
主权项：1.一种低聚合破伤风类毒素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步聚一：破伤风毒素二段盐析纯化分离破伤风发酵液上清，第一次加固体硫酸铵至其终浓度为10～15％WV，完全溶解后，收集上清液；上清液加入硫酸铵，至其浓度20～38％WV，完全溶解，收集沉淀，称重，沉淀缓冲液溶解；用0.001～0.005MPBpH6.5～7.2缓冲液对上述上清液更换缓冲体系，收集破伤风抗原粗提液，于2～8℃保存；步聚二：破伤风毒素层析纯化用DEAESepharoseFF层析介质填装层析柱，用0.001～0.005MPBpH6.5～7.2缓冲液平衡层析柱，步骤1中破伤风抗原粗提液，处理后层析上样，待穿透峰结束，UV280接近基线时，进行洗脱；使用缓冲液0.01～0.05MNaH2PO4+0.05～0.1MNaCl，洗脱并收集，此步收集的蛋白为目标抗原；步聚三：破伤风毒素脱毒取步骤二得到的纯化的400～800Lf破伤风毒素，加0.01～0.1％甲醛溶液，混匀后置于37℃±2条件下作用后，再加入0.01～0.05M赖氨酸溶液，37℃±2下放置14～30天，取样做特异性毒性和毒性逆转检查，如脱毒不完全继续放置至脱毒完全，脱毒完成的类毒素经超滤，除去脱毒剂，备用。
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