申请/专利权人：华中科技大学

申请日：2022-01-06

公开（公告）日：2024-07-05

公开（公告）号：CN114196704B

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/47;C12N15/65;A01K67/0275

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.07.05#授权;2022.04.05#实质审查的生效;2022.03.18#公开

摘要：本发明公开了一种逆向跨多级神经示踪方法，是构建能够表达狂犬病病毒G蛋白的转基因动物，再用失去G蛋白的缺陷型狂犬病病毒株感染转基因动物，利用转基因动物被感染的细胞为失去G蛋白的缺陷型狂犬病病毒株提供G蛋白，恢复感染传播活性，实现逆向跨多级神经示踪目的。该方法对神经元的标记效率和效果都更加优秀，相较于PRV神经元毒性更小、基因组长度更短、而且能感染灵长类动物，因此更有利于后续对神经元形态即功能的研究，更符合后续脑连接组研究的需求。

主权项：1.一种逆向跨多级神经示踪方法，其特征在于，构建能够表达狂犬病病毒G蛋白的转基因动物，再用失去G蛋白的缺陷型狂犬病病毒株感染转基因动物，利用转基因动物被感染的细胞为失去G蛋白的缺陷型狂犬病病毒株提供G蛋白，恢复感染传播活性，实现逆向跨多级神经示踪目的；所述转基因动物构建方法如下：构建含有外源G蛋白编码基因的打靶载体，通过同源重组的方式插入到实验动物胚胎干细胞的Rosa26位点两外显子之间，胚胎干细胞发育获得外源全身性表达G蛋白的转基因动物；所述打靶载体为Rosa26-tdTomato-G-TVA-vector，基因组包括5’同源臂、启动子CAG、LSL表达盒、tdTomato序列、G蛋白编码基因序列、IRES序列、TVA序列、WPRE序列、PA序列、FRT序列、Neo抗性基因、3’同源臂、pGK启动子、DTA序列、polyAsignal、CoLE1质粒复制起点、AmpR抗性基因、F1单链DNA复制起点；所述打靶载体添加有酶切位点，包括SalⅠ、SmaⅠ、EcoRⅤ、XhoⅠ，其中，SalⅠ分别添加在启动子CAG与LSL表达盒之间、tdTomato序列和G蛋白编码基因序列之间、WPRE序列和PA序列之间、Neo抗性基因和3’同源臂之间、3’同源臂和pGK启动子之间，AmpR抗性基因和F1单链DNA复制起点之间；SmaⅠ分别添加在G蛋白编码基因序列和IRES序列之间、PA序列和FRT序列之间；EcoRⅤ分别添加在TVA序列和WPRE序列之间、Neo抗性基因和3’同源臂之间、3’同源臂和pGK启动子之间；XhoⅠ添加在polyAsignal和CoLE1质粒复制起点之间；所述插入外源G蛋白编码基因后的Rosa26位点所在基因核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华中科技大学 一种逆向跨多级神经示踪方法

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