申请/专利权人：山东巧媳妇食品集团有限公司;天津科技大学

申请日：2022-08-23

公开（公告）日：2024-07-05

公开（公告）号：CN115354011B

主分类号：C12N3/00

分类号：C12N3/00;C12N1/14;A23L27/50;C12R1/69

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.07.05#授权;2022.12.06#实质审查的生效;2022.11.18#公开

摘要：本发明公开了一种高产蛋白酶、酶活稳定的酱油种曲的制备方法，包括，种子细胞液制备：称取种曲，加入无菌水，充分振摇后，吸取1mL于9mL无菌水试管中，充分振摇，即得种子细胞液；制得孢子发育载片，观察小室制备培养，优质种曲孢子出芽判定：恒温培养后显微观察计算孢子出芽率及完全出芽孢子率；制备孢子形态固定载片，显微观察计算孢子异变率；其中，用于稳定、高产蛋白酶活的大曲的种曲：孢子出芽率≥95％，完全出芽孢子率≥50％，孢子异变率≤10％。本发明判定出的优质种曲在用于大曲生产后，可明显提高其蛋白酶活性，且制曲成功率也大幅提升。

主权项：1.一种高产蛋白酶、酶活稳定的酱油种曲的制备方法，其特征在于：包括，种子细胞液制备：称取种曲，加入无菌水，充分振摇后，吸取1mL于9mL无菌水试管中，充分振摇，得种子细胞液，其中，种曲与无菌水的质量体积比为1g：50mL，所述种曲中菌种包括米曲霉沪酿3.042，由天津科技大学菌种保藏中心提供；孢子发育载片制备：取种子细胞液滴于盖玻片上，制得孢子发育载片；观察小室制备培养：将培养皿内加入无菌水，孢子发育载片通过两根导管支撑，盖好培养皿，恒温培养，其中，恒温培养温度设置为36℃，培养时间为3.5h；优质种曲孢子出芽判定：恒温培养后显微观察计算孢子出芽率及完全出芽孢子率；孢子形态固定载片制备：取种子细胞液1滴于载玻片上，将盖玻片轻轻由一边压向另一边，使盖玻片与载玻片完全密合，液中无气泡，用滤纸吸干多余液滴，静置1min，取三个清晰明亮含有10-15个孢子的视野，显微观察计算孢子异变率；其中，用于稳定、高产蛋白酶活的大曲的种曲：孢子出芽率≥95%，完全出芽孢子率≥50%，孢子异变率≤10%；所述完全出芽孢子率，其计算方法为：完全出芽孢子率=完全出芽孢子÷视野内全部孢子×100%；其中，完全出芽孢子为芽苗的长度≥孢子直径×2；所述孢子异变率为形态、颜色异常的孢子占视野内全部孢子的数量百分比；中性蛋白酶活为1786~1924单位g。

全文数据：

权利要求：

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