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申请/专利权人：康储科技(广东)有限公司
摘要：本发明公开了一种FGF21修饰的间充质干细胞外泌体制备、纯化浓缩的方法，具体属于生物技术领域。该方法包括步骤有：通过组织贴壁法从脐带华通氏胶中培养培养出初代间充质干细胞，经传代培养得到P5代脐带间充质干细胞，通过含FGF21的慢病毒感染培养P5代脐带间充质干细胞，得到的病毒感染的脐带间充质干细胞培养72小时收集培养基上清液A，收集完上清液A剩余物质中加入培养基继续培养24小时，收集培养基上清液B，将上清液A、B混合得到含FGF21外泌体原液，再通过超滤膜浓缩纯化得含FGF21外泌体浓缩液；本发明通过慢病毒表达载体成功使间充质干细胞表达目标因子FGF21，同时，通过浓缩纯化获得浓度、纯度更高的富含FGF21的外泌体。
主权项：1.一种含FGF21的外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，将脐带处理得华通氏胶，取华通氏胶剪碎，得华通氏胶组织块；S2，将华通氏胶组织块于培养基中，通过组织贴壁法培养8-12天，得到初代脐带间充质干细胞；S3，将所述初代脐带间充质干细胞培养3-5天为第二代，重复培养操作4次，得到P5代脐带间充质干细胞；S4，取含有FGF21表达载体的慢病毒，所述慢病毒按≥25MOIs感染复数与所述P5代脐带间充质干细胞混合，并加入助感染剂，混合均匀，离心，培养≥24小时，得病毒感染的脐带间充质干细胞；S5，取所述病毒感染的脐带间充质干细胞接种至培养基，培养≥72小时，收集培养基的上清液A；S6，步骤S5收集完上清液A后重新加入新培养基，继续培养≥24小时，收集培养基的上清液B，将上清液A、B混合，得到含FGF21外泌体原液；S7，将所述含FGF21外泌体原液经过超滤浓缩，浓缩至≥10倍后，用生理盐水进行置换，最后过滤除菌，得含FGF21的外泌体；所述FGF21为SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。
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权利要求：
百度查询： 康储科技(广东)有限公司 FGF21修饰的间充质干细胞外泌体制备、纯化浓缩的方法
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