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申请/专利权人：上海璟因特科生物科技有限公司
摘要：本发明涉及核酸提取技术领域，特别涉及一种新型染色体结构变异检测的NGS建库方法，利用转座酶混液、转座酶缓冲液对基因组DNA进行打断和转座序列的添加，得到第一打断产物2‑10Kb；利用链置换酶混液对第一打断产物进行缺口补平同时添加生物素标记；利用Gibson组装酶混液对生物素标记的片段进行环化，得到环化产物；利用消化酶混液对未环化的DNA片段进行消化处理；利用片段化酶混液对环化产物打断并进行末端修复及加A，得到第二打断产物200‑800bp；利用连接酶混液及对应缓冲液以及接头对修复片段进行接头连接，得到接头连接片段；利用扩增酶混液和index序列，通用引物对待接头片段进行PCR富集，得到DNA文库300‑800bp。
主权项：1.一种新型染色体结构变异检测的NGS建库方法，其特征在于，包括如下步骤，步骤一、使用转座酶与转座子序列进行包埋，再采用包埋后的产物将核酸打断成片段，与此同时打断片段的两端连接上了相应的转座子序；步骤二、再通过链置换反应，采用Biotin-dNTP补平所述转座子序列与所述打断的片段之间的缺口，得到完整的双链核酸片段，所述Biotin-dNTP添加后使核酸片段带上生物素标记；步骤三、通过Gibson组装体系将上一步得到的带生物素标记的核酸片段环化成环状核酸片段；步骤四、使用消化酶消化未环化的线性核酸片段；使用链霉素亲和性磁珠捕获带有所述生物素标记的环状核酸片段；使用打断酶对结合在所述链霉素亲和性磁珠上的环状核酸片段进行酶切片段化反应，并进行末端修复及加A，再进一步清洗去除未捕获到的核酸片段；步骤五、再使用接头连接添加所需测序平台对应的接头；再采用引物进行扩增及添加index，用于生成最终文库并测序。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 上海璟因特科生物科技有限公司 一种新型染色体结构变异检测的NGS建库方法
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