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申请/专利权人:山东尖子生物技术有限责任公司
摘要:本发明公开了一种从冷冻三文鱼精巢组织提取高质量多聚脱氧核糖核苷酸的方法,具体涉及生物技术领域,该方法具体步骤为:S1:鲑鱼精巢处理匀浆;S2:裂解释放DNA;S3:收集纯化DNA;S3.2向S3.1上清液加终浓度5.0molLNaCl预冷和1%SDS预冷,搅拌混匀,低温离心取上清;S3.3向S3.2上清液加终浓度5.0molLNaCl预冷和1%SDS预冷,搅拌混匀,再次离心取上清;S4:沉淀浓缩DNA;S5:洗涤DNA;S6:超声打断DNA,获取PDRN,将得到的DNA沉淀物,低温超声打断,真空冻干得白色固体即为PDRN样品。本发明能够降低DNA降解,减少PDRN损耗,提高提取率,提高PDRN质量,难发生美拉德反应,缩短时间,降低成本,提高经济效益。
主权项:1.一种从冷冻三文鱼精巢组织提取高质量多聚脱氧核糖核苷酸的方法,其特征在于:该方法具体步骤为:S1:鲑鱼精巢处理匀浆:库取出鲑鱼精巢组织,无菌解冻,无菌水反复清洗,清洗后的精巢组织加入预冷的破碎缓冲液,低温破碎,低温离心6500rpm~9000rpm20~30min,弃上清,获得沉淀产物;S2:裂解释放DNA:沉淀产物中加入裂解缓冲液,搅拌混匀,37℃裂解10-16小时;S3:收集纯化DNA:S3.18000rm低温离心40min取上清;S3.2向S3.1上清液加终浓度5.0molLNaCl预冷和1%SDS预冷,搅拌混匀,低温离心取上清。S3.3向S3.2上清液加终浓度5.0molLNaCl预冷和1%SDS预冷,搅拌混匀,再次离心取上清;S4:沉淀浓缩DNA:1:2的体积比例向上述上清液加入预冷无水乙醇,混匀,低温静析沉淀;S5:洗涤DNA:用预冷的75%乙醇洗涤步骤S4得到的DNA沉淀物3次,并干燥;S6:超声打断DNA,获取PDRN:1.5molLNaCl溶解步骤S5得到的DNA沉淀物,低温超声打断,真空冻干得白色固体即为PDRN样品。
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