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申请/专利权人：中泽赛奥(海南)生物科技有限公司
摘要：本发明公开了一种可以延缓细胞衰老的人间充质干细胞的制备方法和应用。该技术方案对人间充质干细胞的分离方法和扩增培养工艺进行了创新性改进。具体来看，本发明将人血液离心后弃上清，用完全培养基重悬沉淀；将培养基重悬的细胞悬液滴加到Percoll分离液上方，形成密度梯度分离液；再次离心后吸取中间层的白色雾状细胞层，加入PBS清洗细胞，再次离心；弃上清，保留细胞沉淀；用细胞完全培养基重悬沉淀，将细胞悬液按接种于后静置培养；首次2d换液，弃去未贴壁细胞，此后每2～3d换液一次；待细胞融合达80％后，用胰酶消化1～2min；消化后的细胞种于扩增培养基中，经两级扩增培养后得到产物。本发明充分提高了细胞扩增效率和细胞活性，具有显著的技术优势。
主权项：1.一种可以延缓细胞衰老的人间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括：1将装有人血液的15mL离心管，1500rpm离心5min；弃上清，用完全培养基重悬沉淀；将培养基重悬的细胞悬液滴加到Percoll分离液上方，形成密度梯度分离液；2000～2500rpm离心25min，吸取中间层的白色雾状细胞层，加入PBS清洗细胞，1800rpm离心5min；2弃上清，保留细胞沉淀；用细胞完全培养基重悬沉淀，将细胞悬液按1×106mL密度接种于T25瓶中，于37℃，5％CO2恒温培养箱中静置培养；首次2d换液，弃去未贴壁细胞，此后每2～3d换液一次；待细胞融合达80％后，用胰酶消化1～2min；3将步骤2消化后的细胞种于扩增培养基中培养1-3天，培养温度为35～38℃，得到一次培养物；向一次培养物中补加gm-csf、IL-7和pha，继续培养1-3天；向二次培养物中加入IL-3、IL-13、IL-25、叶黄素、DMBA，继续培养1-3天。
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百度查询： 中泽赛奥(海南)生物科技有限公司 一种可以延缓细胞衰老的人间充质干细胞的制备方法和应用
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