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申请/专利权人：王意忠

摘要：本发明提供了一种培养间充质干细胞的方法，其包括：步骤S1，利用组织样品培养获得间充质干细胞的原代细胞和或传代细胞；步骤S2，将步骤S1中培养获得的所述原代细胞和或所述传代细胞进行传代培养；步骤S3，在低氧条件下对步骤S2中培养获得的细胞进行培养；步骤S4，将步骤S3中培养获得的细胞在低氧高糖条件下进行培养；以及，步骤S5，将在步骤S4中培养生长的细胞进行激活培养。利用本发明的方法培养的间充质干细胞制备的细胞制剂具有长时间的细胞活率保持，同时在糖尿病治疗中具有更优的疗效。利用本发明方法培养的间充质干细胞在诱导胰岛细胞的过程中具有更高的转化率及胰岛素分泌能力。

主权项：1.一种培养间充质干细胞的方法，其包括：步骤S1，利用组织样品培养获得间充质干细胞的原代细胞和或传代细胞；步骤S2，将步骤S1中培养获得的所述原代细胞和或所述传代细胞进行传代培养；步骤S3，在低氧条件下对步骤S2中培养获得的细胞进行培养；步骤S4，将步骤S3中培养获得的细胞在低氧高糖条件下进行培养；以及，步骤S5，将在步骤S4中培养生长的细胞进行激活培养，在步骤S1，于第一细胞培养液中在37℃、5%CO2条件下培养生长所述原代细胞和或传代细胞，其中，所述第一细胞培养液是额外添加有0.1~0.5%（vv）人血白蛋白、0.2~2%（vv）的胰岛素-转铁蛋白-硒、2~10%（vv）人源血小板裂解液以及0.1~0.5%（vv）B27的低糖DMEM培养基，所述第一细胞培养液中的葡萄糖终浓度调整为4~7mmolL，在步骤S2，将在步骤S1中培养获得的所述原代细胞和或所述传代细胞于第二细胞培养液中在37℃、5%CO2条件下进行传代培养，连续培养1~3个代次，其中，所述第二细胞培养液是额外添加有0.1~0.5%（vv）人血白蛋白、0.2~2%（vv）的胰岛素-转铁蛋白-硒、2~10%（vv）人源血小板裂解液以及0.1~0.5%（vv）B27的低糖DMEM培养基，所述细胞培养液中的葡萄糖终浓度调整为4~7mmolL，在步骤S3，将步骤S2中培养获得的细胞收集后，于所述第二细胞培养液中在37℃、5%CO2以及培养环境中氧浓度为8~18%的低氧条件下培养至细胞达到传代密度，在步骤S4，将步骤S3中培养获得的细胞于第三细胞培养液中在37℃、5%CO2以及培养环境中氧浓度为8~18%的条件下培养至细胞达到传代密度，其中，所述第三细胞培养液是额外添加有0.1~0.5%（vv）人血白蛋白、0.2~2%（vv）的胰岛素-转铁蛋白-硒、2~10%（vv）人源血小板裂解液以及0.1~0.5%（vv）B27的低糖DMEM培养基，所述细胞培养液中的葡萄糖终浓度调整为8~25mmolL，在步骤S5，将步骤S4中培养生长的细胞于所述第三细胞培养液中在37℃、5%CO2以及环境中氧浓度为8~18%的低氧条件下培养，当细胞生长至细胞融合度达到20~80%时，加入胰高糖素样肽-1，对细胞进行激活培养，其中培养体系中胰高糖素样肽-1的终浓度为5~100nmolL。

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