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申请/专利权人：北京大学第三医院(北京大学第三临床医学院)
摘要：本发明涉及环状DNA合成技术领域，特别是涉及一种简单且高效的大eccDNA的合成方法。本发明提供的合成方法具有简单高效的优势，可用于合成含有多片段的eccDNA，且合成的eccDNA产量高，纯度高。
主权项：1.一种染色体外环状DNA的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：1以基因组DNA为模板，进行第一轮PCR扩增，得到待合成的染色体外环状DNA对应的一个或多个第一线性DNA片段；2以步骤1所述的第一线性DNA片段为模板，进行第二轮PCR扩增，得到扩增产物；所述扩增产物为至少两种第二线性DNA片段，且含有待合成的染色体外环状DNA的所有序列；以所述第二线性DNA片段在待合成的染色体外环状DNA的位置排序，相邻第二线性DNA片段两侧有15～25bp序列完全重叠；3采用无缝克隆的方式连接步骤2中的所有第二线性DNA片段，得到初级染色体外环状DNA；4以待合成的染色体外环状DNA全长序列设计两对5'端具有磷酸化修饰的引物，以步骤3所述初级染色体外环状DNA为模板，分别经第三轮PCR扩增反应，得到待合成的染色体外环状DNA全长序列对应的两个第三线性DNA片段；5利用DNA连接酶将步骤4得到的两个第三线性DNA片段连接，得到所述染色体外环状DNA。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京大学第三医院(北京大学第三临床医学院) 一种简单且高效的大eccDNA的合成方法
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