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申请/专利权人：浙江迪福润丝生物科技有限公司
摘要：本发明公开了一种JEV蛋白酶抑制剂的筛选方法和抑制效果评价方法，在GFP中插入JEV的NS2BNS3蛋白酶相关裂解位点的序列，形成改造后的荧光蛋白报告蛋白，在该荧光蛋白报告蛋白质粒上，克隆表达JEVNS2BNS3蛋白酶，可用于筛选蛋白酶抑制剂以及对蛋白酶抑制剂活性的评价，最终形成JEV蛋白酶抑制剂筛选及药效评价平台。本发明能够避免使用JEV活病毒引发的安全性顾虑，对生物安全等级要求低，BSL‑1级实验室即可满足实验要求，高效、准确、稳定、高通量、可重复的用于JEV蛋白酶抑制剂筛选及药效评价。
主权项：1.一种JEV蛋白酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）构建共表达改造的GFP和JEVNS2BNS3蛋白酶的质粒，所述改造的GFP为在野生型GFP上插入JEVNS2BNS3蛋白酶切割序列而成；（2）筛选：将待转染细胞铺于多孔板中，然后加入共表达改造的GFP和JEVNS2BNS3蛋白酶的质粒进行转染，对转染后的细胞进行培养，同时向多孔板中添加不同组的待筛选抑制剂，以不添加待筛选抑制剂的为对照，观察细胞状态及荧光拍照，并检测荧光强度；若与对照相比荧光强度增加，则表示待筛选抑制剂具有抑制效果，荧光强度增加越多则代表待筛选抑制剂的抑制效果越强；JEVNS2BNS3蛋白酶切割序列在野生型GFP氨基酸序列上的插入位点包括位点C和位点D；位点C为野生型GFP氨基酸序列第159~160位氨基酸，或与野生型GFP氨基酸序列相比具有99%以上序列一致性的氨基酸序列上对应的氨基酸区域；位点D为野生型GFP氨基酸序列第170~171位氨基酸，或与野生型GFP氨基酸序列相比具有99%以上序列一致性的氨基酸序列上对应的氨基酸区域；所述野生型GFP氨基酸序列见SEQIDNo.1所示；JEVNS2BNS3蛋白酶切割序列包括cut1、cut2，cut1氨基酸序列为AGKRSAIS，cut2氨基酸序列为SLKRGRPG。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江迪福润丝生物科技有限公司 JEV蛋白酶抑制剂的筛选方法和抑制效果评价方法
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