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申请/专利权人:广西壮族自治区动物疫病预防控制中心(广西壮族自治区屠宰技术中心)
摘要:本发明公开了一种针对可以同时检测猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、经典猪瘟病毒(CSFV)和猪乙型脑炎病毒(JEV)的多重RT‑qPCR试剂盒及检测方法。所述试剂盒包括如序列表SEQIDNO.1~SEQIDNO.12所示的引物和探针。所述的检测方法是将血液、脑组织、肝、肺、脾、肾、淋巴结、扁桃体等猪组织作为待测样品,先进行总DNARNA提取,然后将得到的总DNARNA作为模版,再加入上述引物和探针配制得到扩增反应液进行RT‑qPCR扩增,通过读取荧光定量PCR仪自带软件绘制的扩增曲线所对应的Ct值来进行结果判定,从而确定区分以上病毒。本发明具有灵敏度高、特异性高、操作简单的优点,可以同时、快速、准确的检测四种病毒,为实验室检测区分这四种病毒提供了有效的技术手段。
主权项:1.一种同时检测PHEV、PRV、CSFV、JEV的RT-qPCR试剂盒,其特征在于:包括以下引物和探针:引物F1的序列为TCCAAGCAAACTGCTACTTCT;引物R1的序列为GTCCCTCTGCAAATTCAAACTC;探针A的序列为FAM-AGCAACCATCAGGAGGGACTGTTG-BHQ1;引物F2的序列为GGCAAGTGCGTCTCCAA;引物R2的序列为GTAGGTGTCGTTGGTGGTG;探针B的序列为VIC-CTTGTGGTTGTTGCGCACGTACTC-BHQ1;引物F3的序列为AGTACAGGACAGTCGTCAGTAG;引物R3的序列为CCAGGGTTAAGGTGTGTCTTG;探针C的序列为TexasRed-AGATGCTATGTGGACGAGGGCATG-BHQ2;引物F4的序列为CAACGAGAAGCGAGCTGATA;引物R4的序列为TGTTCTCCCAATCGCCTTAC;探针D的序列为CY5-TCGGGAAGGGAAGCATTGACACAT-BHQ2。
全文数据:
权利要求:
百度查询: 广西壮族自治区动物疫病预防控制中心(广西壮族自治区屠宰技术中心) 同时检测PHEV、PRV、CSFV、JEV的RT-qPCR试剂盒及检测方法
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