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申请/专利权人：南京农业大学
摘要：本发明涉及一种检测CSFV、PPV、JEV、PRRSV抗体的Cy3标记蛋白芯片、试剂盒及检测方法。所述芯片载体为环氧基修饰的光学级玻片，其成本较低，适合产业化大规模购买和生产。本发明通过原核表达获得目的抗原，将蛋白通过晶芯PersonalArrayer16接触式点样系统点制芯片，其特征在于每个基片至少包含一个检测区，每个检测区至少包含5个检测亚区，分别为CSFV、PPV、JEV、PRRSV、检测区及2％BSA阴性对照区。检测结果通过博奥Luxscan‑10KA芯片扫描仪读取荧光值，在临床使用中，本发明具有特异性高、灵敏性强、能高通量检测的优点。
主权项：1.一种同时检测CSFV、PPV、JEV、PRRSV抗体的Cy3标记蛋白芯片制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：S1：截取CSFV-E2、JEV-EDIII、PRRSV-N基因特异性抗原表位，分别将CSFV-E2、JEV-EDIII、PRRSV-N基因特异性抗原表位、PPV-VP2基因序列，克隆至pET-32a原核表达载体，转化至DH5α感受态细胞进行扩增，构建得到重组表达质粒pET-32a-E2、pET-32a-EDⅢ、pET-32a-N、pET-32a-VP2；S2：鉴定正确的重组质粒pET-32a-E2、pET-32a-VP2、pET-32a-EDⅢ、pET-32a-N分别转化至大肠杆菌BL21感受态，IPTG诱导，离心分离上清和包涵体，对包涵体进行洗涤、溶解、过滤后用His标签高亲和力Ni柱纯化，得到目的蛋白CSFV、PPV、JEV、PRRSV，BCA蛋白定量试剂盒测定浓度后-80℃保存；S3：将S2制得的重组蛋白CSFV、PPV、JEV、PRRSV稀释后，点样在芯片载体上，所述载体为环氧基片，经水合、干燥、封闭、洗涤制得检测CSFV、PPV、JEV、PRRSV抗体的Cy3标记蛋白芯片，储存备用；优选的，所述储存条件为4℃。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京农业大学 同时检测CSFV、PPV、JEV、PRRSV抗体的荧光标记蛋白芯片制备和检测方法
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