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申请/专利权人：四川省肿瘤医院

摘要：本发明公开了一种基于非靶向代谢组学检测GIST患者血浆中伊马替尼代谢物的方法，采集若干名未服用及长期规律服用IM的GIST患者外周静脉血，进行处理后，采用UPLC‑QTOFMS联用技术对待测样本进行非靶向检测，得到血浆中的代谢物原始数据，对原始数据进行无监督主成分分析分析PCA、正交偏最小二乘法判别分析OPLS‑DA、Student’st‑test和差异倍数分析FoldChange，并寻找差异代谢物，检索数据库定性出GIST代谢标志物。为适用于IM治疗的GISI患者的有效性治疗提供技术支撑，可为消化道肿瘤确诊后的药物治疗有效性、针对性及无创筛选、标志物表征奠定基础。

主权项：1.一种基于非靶向代谢组学检测GIST患者血浆中伊马替尼代谢物的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、分别采集若干名未服用及长期规律服用IM的GIST患者的外周静脉血，并将采集的外周静脉血进行离心处理，然后低温保存，得到血浆样本；S2、采用二维液相色谱法分析血浆样本中IM血药浓度，根据测出的血药浓度值，将所述的血浆样本分成A、B、C、D组；其中，将血浆样本编号为1-40，采用二维液相色谱法依次分析已编号的血浆样本中IM血药浓度，根据测出的血药浓度值，将IM血药浓度＞2000ngmL的设为A组、IM血药浓度1100-2000ngmL的设为B组、IM血药浓度＜1100ngmL的设为C组和未服用IM的GIST患者设为D组；S3、样本处理，分别量取100μL的A、B、C、D组的血浆样本转移到1.5mL离心管中，加入300μL含有1ppm的2-氯苯丙氨酸的甲醇中使用涡旋2min，于-20℃下冰箱孵育0.5h；取孵育后的样本涡旋2min，于4℃下12000rmin离心处理10min，收取200μL上清液转置新的1.5mL离心管中，于-20℃下静置0.5h；静置后的上清液于4℃下12000rmin再次离心15min，转置进样瓶中，得到待测样本，其中涡旋处理采用涡旋混合器，离心处理采用离心机，温度设置采用超低温冰箱；S4、对待测样本进行非靶向检测，得到血浆中的代谢物原始数据；其中，非靶向检测，采用UPLC-QTOFMS联用技术对待测样本进行非靶向检测，依次取样，得到血浆样本中的代谢物原始数据；UPLC：WatersT3C18柱，i.d.2.1×100mm,1.8μm，柱温40℃，流速0.35mLmin，进样量2μL，0.04%乙酸水的流动相A，0.04%乙酸乙腈的流动相B，从开始到10min，A泵的流动相比例从95%匀速减少为5%，同时B泵的流动相比例从5%匀速增长为95%；从10min到11min保持上述比例；从11min到11.1minA泵的流动相比例从5%匀速增长为95%，同时B泵的流动相比例从95%匀速减少为5%；保持至14min；QTOFMS：正离子模式下：电压Voltage：250v；气体流量GasFlow：8Lmin；碎裂电压Fragmentor：135v；气体温度GasTemperature：325℃；鞘气温度SheathTemperature：325℃；鞘流SheathFlow：11Lmin；喷雾器Nebulizer：40psi；负离子模式下：电压Voltage：1500v；气体流量GasFlow：8Lmin；碎裂电压Fragmentor：135v；气体温度GasTemperature：325℃；鞘气温度SheathTemperature：325℃；鞘流SheathFlow：11Lmin；喷雾器Nebulizer：40psi；S5、对原始数据进行多变量分析，并以OPLS-DA模型的变量投影重要度值，即VIP值结合t检验的P值以及差异倍数分析的FC值，并以VIP≥1,P0.05，FC≥2或≤0.5的条件寻找差异代谢物，检索数据库以定性出GIST代谢标志物；S6、对代谢标志物进行KEGG通路分析，确定GISI患者的代谢过程，所述通路为鞘脂代谢、P450代谢、咖啡因代谢、维生素消化吸收，所述鞘脂代谢包括D-鞘氨醇、1-磷酸鞘氨醇、植物鞘氨醇、磷酸乙醇胺。

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