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申请/专利权人：宁波大学

摘要：本发明公开了基于杂交链反应及TdT调控双重信号放大的铅离子交流阻抗传感器研究，具体步骤如下：处理Au，用HP修饰，发夹探针H1和发夹探针H2混合均匀滴到电极表面，HCR反应发生，然后TdT缓冲液、dATP、dGTP、TdT，混合均匀，滴于电极表面，TdT扩增反应发生，再依次滴加Pb2+、hemin、DAB、H2O2标记为IPG4HCRAu，用于EIS检测。在传感器制备过程中，改变Pb2+浓度探究所制备的一系列传感器对电化学阻抗信号的影响。优点是灵敏度高、检测速度快、结果准确可靠、成本低。

主权项：1.一种基于杂交链反应及TdT调控双重信号放大的铅离子Pb2+交流阻抗传感器，其特征在于，制备步骤如下：1金电极Au：首先在含有粒径为0.05μm的Al2O3悬浮液的抛光布上抛光，然后在水中超声1～6min处理，再用蒸馏水缓缓冲洗三次，获得干净的金电极Au；2HCRAu：a.金电极Au用氮气吹干后置于HP溶液中组装3～12h，蒸馏水缓缓冲洗；接着把电极浸泡在0.5～5mM的巯基己醇MCH水溶液中10～30min，蒸馏水缓缓冲洗；b.将0.2～3μL10×Tris反应缓冲液、发夹探针H1、发夹探针H2混合均匀并滴到步骤a中电极表面，在25～39℃下反应0.5～1.2h，蒸馏水缓缓冲洗，标记为HCRAu；其中所述HP为含有巯基并可引发杂交链反应HCR序列的DNA辅助探针，用量为1～6μL，浓度为0.01～0.6μM；发夹探针H1用量为0.1～2.5μL，浓度为0.02～1μM；发夹探针H2用量为0.1～2.5μL，浓度为0.02～1μM；3G4HCRAu：a.控制TdT反应液总体积为2.5μL：加入TdT缓冲液，dATP，dGTP，TdT，混合均匀，滴于HCRAu表面，在25～39℃下放置0.3～1.3h，蒸馏水缓缓冲洗电极；b.再滴加Pb2+和血红素hemin，室温下静置15～50min，蒸馏水缓缓冲洗；其中dATP用量为0.2～0.8μL，浓度为0.5～10mM；dGTP用量为0.1～1.3μL，浓度为0.8～12mM；TdT用量为0.2～1.5μL，浓度为0.5～12UmL；Pb2+用量为0.6～6μL，浓度为0～5000nM；血红素hemin用量为0.8～8μL，浓度为0.5～2μM；4IPG4HCRAu：滴加3，3-二氨基联苯胺和H2O2，静置10～60min，标记为IPG4HCRAu，用于EIS检测；其中3，3-二氨基联苯胺用量为2～10μL，浓度为1～20mM；H2O2用量为2～10μL，浓度为1～20mM；所述IPG4HCRAu中IP表示3，3-二氨基联苯胺被氧化形成不导电的不溶性沉淀物。

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百度查询： 宁波大学 基于杂交链反应及TdT调控的铅离子传感器及应用