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申请/专利权人：郑州大学

摘要：本发明属于生物分析领域，涉及氨苄青霉素的检测，特别是指基于TdT和G4hemin模拟酶扩增技术的适配体传感器的构建方法及应用。以一种新型的AuNPs@SnIn4S8‑GR敏化结构作为光电活性材料获得了强烈的基础光电流；目标物氨苄青霉素存在时，由链置换得到P1引入到电极表面后，在TdT和hemin存在下形成大量的G4hemin；随后，具有辣根类过氧化酶活性的G4hemin催化H2O2氧化4‑CN在修饰电极表面生成4‑CD沉淀，严重阻碍了电子转移，有效抑制了光电流输出，通过测量光电流信号即可实现对氨苄青霉素的定量分析；灵敏度高，稳定性好，选择性好，在生物分析和环境监测中具有很好的应用前景。

主权项：1.基于TdT和G4hemin模拟酶扩增技术的适配体传感器的构建方法，其特征在于，步骤如下：（1）将GO分散在超纯水中，然后加入SnCl4·5H2O的CH3COOH溶液，再依次加入InCl3·4H2O和SDBS，超声搅拌后加入TAA，搅拌后倒入反应釜中反应至完全，冷却至室温后，离心、洗涤、烘干得SnIn4S8-GR；（2）将步骤（1）的SnIn4S8-GR溶于超纯水中，加入柠檬酸钠溶液后，搅拌加热至沸腾后，迅速加入氯金酸，继续沸腾一段时间后关闭热源，继续搅拌冷却至室温，经离心、洗涤、烘干得AuNPs@SnIn4S8-GR；（3）取MBs经磁分离后用PBS溶液洗涤三次，然后加入到溶有NHS和EDC的PBS溶液中，振荡活化后用PBS溶液洗涤，再加入Apt溶液，振荡过夜，反应结束后经磁分离得MBs-Apt溶液，再与P1溶液混合，振荡过夜，经磁分离洗涤后得MBs-Apt-P1；（4）配制步骤（2）得到的AuNPs@SnIn4S8-GR的超纯水溶液，滴涂在ITO电极表面，在红外灯下烘干，再将S1溶液滴加到烘干后的ITO电极表面，孵育过夜后，用Tris-HCl缓冲液洗涤除去多余的S1，得预处理电极；（5）将步骤（4）的预处理电极置于MCH溶液中孵育得检测电极，同时将步骤（3）的MBs-Apt-P1分散于PBS溶液中，然后加入不同浓度氨苄青霉素标准溶液，振荡一段时间后，取上清液滴到检测电极表面，孵育后再依次滴加TdT溶液、TdTbuffer、dATP溶液和dGTP溶液，混匀后孵育一段时间得G-richssDNA，洗涤后加入hemin溶液，避光孵育后在检测电极表面形成G4hemin；（6）将4-CN溶液和H2O2溶液滴加到经步骤（5）处理的检测电极的表面，室温孵育一段时间，于含有AA的PBS溶液中检测光电流值，建立光电流值与氨苄青霉素浓度之间的定量关系，得到氨苄霉素标准溶液的工作曲线；所述Apt的碱基序列为5’-NH2-CH26-GCGGGCGGTTGTATAGCGG-3’，P1的碱基序列为5’-GCGTATACAACCGCCCGC-3’；所述S1的碱基序列为5’-GGCGGTTGTATACGC-CH26-SH-3’。

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