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申请/专利权人：上海海洋大学

摘要：本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种基于TdT信号放大技术的试纸条及其制备方法，试纸条的结合释放垫上包覆树枝状纳米金复合物，树枝状纳米金复合物包括纳米金‑夹心适配体1‑PolyN1复合物和纳米金‑PolyN2复合物；反应膜包被夹心适配体2的检测限，包被与PolyN2互补的序列探针的质控线。制备包括：结合释放垫浸泡吸收含有树枝状纳米金复合物的缓冲液，干燥；含有标记链霉亲和素‑生物素的夹心适配体2的溶液与含有标记链霉亲合素‑生物素的与PolyN2互补的序列探针的溶液经划膜仪分别包被于反应膜上；沿层析方向将样品垫、结合释放垫、反应膜和吸收垫依次固定于背衬上。该试纸条放大检测信号，提高检测灵敏度。

主权项：1.一种基于TdT信号放大技术的试纸条，其特征在于，背衬底板上沿层析方向依次固定样品垫、结合释放垫、反应膜和吸收垫，且依次相邻的两者间部分重叠；结合释放垫上包覆树枝状纳米金复合物，树枝状纳米金复合物包括纳米金-夹心适配体1-PolyN1复合物和纳米金-PolyN2复合物，纳米金-夹心适配体1-PolyN1复合物中修饰有PolyN1扩增序列的夹心适配体1以纳米金颗粒为中心呈辐射状分布，纳米金-PolyN2复合物中PolyN2序列以纳米金颗粒为中心呈辐射状分布，纳米金-夹心适配体1-PolyN1复合物与纳米金-PolyN2复合物通过互补杂交固定；PolyN1与PolyN2为互补序列，N1为A或T；反应膜上沿层析方向依次设有检测线和质控线，检测线包被夹心适配体2，质控线包被与PolyN2互补的序列探针；夹心适配体1和夹心适配体2为能够捕获目标检测物的DNA序列；纳米金颗粒的粒径为10～20nm，PolyN1的长度为100～300个碱基，PolyN2和与PolyN2互补的序列探针的长度为8～15个碱基；所述树枝状纳米金复合物的制备步骤包括：纳米金-夹心适配体1-PolyN1复合物与纳米金-PolyN2复合物于杂交体系中，90℃杂交2min，即得树枝状纳米金复合物；所述纳米金-夹心适配体1-PolyN1复合物的制备步骤包括：TdT酶介导下，纳米金-夹心适配体1复合物与dN1TP于反应缓冲液中，37℃扩增2h，即得纳米金-夹心适配体1-PolyN1复合物；夹心适配体2包被于反应膜上形成检测线，夹心适配体2的3’端修饰的生物素结合链霉亲合素，链霉亲合素连接反应膜；与PolyN2互补的序列探针包被于反应膜上形成质控线，与PolyN2互补的序列探针的3’端修饰的生物素结合链霉亲合素，链霉亲和素连接反应膜。

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