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申请/专利权人：河北民族师范学院

摘要：本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：1将山杏叶阴干粉碎；2加入酵母菌液体菌种固体发酵；3有机溶剂浸提；4水浴加热，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放；5抽滤过滤留滤液；6通过旋转蒸发浓缩获得山杏叶角鲨烯粗提物。本发明提供的山杏叶提取角鲨烯的方法工艺简单，成本较低，制备的角鲨烯纯度好，开辟了角鲨烯的新原料源，具有较强的实用性。

主权项：1.一种山杏叶角鲨烯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）原料准备：选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干，粉碎成山杏叶粉；（2）固体发酵：向步骤（1）的山杏叶粉内加入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；活化好的酵母菌液体菌种为酿酒酵母菌在PDA液体培养基中培养30h，在活化好的酵母菌液体菌种加入之前，加入麸皮和红糖的混合物，接入活化好的酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的5～30%，所述的固体发酵为25～30℃下发酵培养6～15天；（3）有机溶剂浸提：在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提1～2次；所述的有机溶剂为30～60℃的石油醚、60～90℃的石油醚或环己烷中任意一种；（4）水浴加热：将步骤（3）中浸提的液体在50～70℃水浴环境下加热1～4小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；所述的需要保持角鲨烯不被氧化是通过控制温度不超过70℃实现；（5）过滤：对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；（6）浓缩：将步骤（5）所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物。

全文数据：一种山杏叶角鲨烯的制备方法技术领域[0001]本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种山杏叶角鲨烯的制备方法。背景技术[0002]随着生活水平的提高，人们对自身的健康日益关注，全球居民的健康消费水平逐年攀升。由于天然营养保健食品不以治病为目的，能调节人体机能、有特定保健功能，适合于特定人群食用。所以，保健品市场需求十分旺盛。国家卫生部限定的保健食品功能，包括：增强免疫力、改善睡眠、改善营养性贫血、改善生长发育、缓解体力疲劳、提高缺氧耐受力、对辐射危害有辅助保护功能、辅助改善记忆、辅助降血脂、辅助降血糖、辅助降血压、促进消化、减肥、抗氧化、调节肠道菌群、通便等27种。世界各国对保健食品的开发都非常重视，新功能、新产品、新造型和新的食用方法不断出现。[0003]角鲨烯是在黑鲨鱼肝油中发现的一种高度不饱和烃类化合物，是一种重要的生物活性物质，具有增强免疫力、抗癌、防癌及保湿养颜作用，广泛应用于化妆品、医药、保健品、食品等许多行业。目前提取角鲨烯，多以大鲨鱼肝为原料，资源短缺。因此，寻找新的角鲨烯原料资源是提高角鲨烯产量、降低产品价格的必要途径。发明内容[0004]本发明为了克服上述技术问题的不足，提供了一种山杏叶角鲨烯的制备方法，可以很大程度上扩大角鲨烯原料资源。[0005]解决上述技术问题的技术方案如下：[0006]一种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：[0007]⑴原料准备:选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴千，粉碎成山杏叶粉；[0008]2固体发酵：向步骤（1的山杏叶粉内加入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；[0009]⑶有机溶剂浸提:在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提i〜2次；[0010]⑷水浴加热：将步骤⑶中浸提的液体在5〇〜7〇°C水浴环境下加热1〜4小时，优选2〜3小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；[0011]5过滤:对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；[0012]6浓缩:将步骤⑸所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物。[0013]进一步地说，步骤⑴所述的山杏叶为秋天落叶，粉碎至⑽〜丨〗。目，优选粉碎至9〇〜110目。[0014]进一步地说，步骤2所述的活化好的酵母菌液体菌种为酿酒酵母菌在pDA液体培养基中培养3〇h，在活化好的酵母菌液体菌种加入之前，加入麸皮和红糖的混合物，接入活化好的酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的5〜3〇%，优选为丨〇〜2〇%，所述的固体发酵为25〜30°C下发酵培养6〜I5天，优选为28〜30°C下发酵培养10〜15天。[0015]进一步地说，步骤⑶中所述的有机溶剂为3〇〜6〇°C的石油醚、6〇〜9〇°C的石油醚或环己烷中任意一种，优选为60〜90°C的石油醚。[0016]进一步地说，步骤⑶中山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:2〜1〇。[0017]进一步地说，步骤4中所述的需要保持角鲨烯不被氧化是通过控制温度不超过70°C实现。[0018]进一步地说，步骤⑹中所述的旋转蒸发是在6〇〜90°C真空条件下进行，优选为60〜80°C真空条件下进行。[0019]该山杏叶角鲨烯的应用是可以将山杏叶角鲨烯粗提物生产保健食品。[0020]本发明的有益效果是：[0021]本发明提供了一种从山杏叶提取角鲨烯的方法，工艺简单，成本较低，制备的角鳘烯纯度好，开辟了角鲨烯的新原料源，具有较强的实用性。[0022]我国有山杏面积3000多万亩，据估算每年山杏叶的产量为12000多万t。但总体来说，山杏叶的利用率极低，研宄发现，山杏叶中含有五环三萜类化合物、黄酮类化合物等生物活性物质，山杏叶提取物具有很高的抗氧化生物活性。对山杏叶提取物进行GC-MS分析，发现其中角鲨烯含量较高。另据报道，酵母菌中角鲨烯含量相对较高，借助酵母菌发酵山杏叶，将山杏叶的纤维素分解，促进角鲨烯释放，同时酵母菌生长合成角鲨烯。[0023]本发明以秋天山杏落叶为原料，经酵母发酵，促进山杏叶角鲨烯的释放，同时酵母菌生长合成角鲨烯，利用石油醚或环己烷非极性高的特点，溶解山杏叶中的角鲨烯，使其充分释放出来，大大提高了成品中角鲨烯含量。在操作过程中，是直接将山杏叶发酵物与石油醚或者环己烷混合，通过水浴加热处理加速有效成分的释放，简单高效；山杏叶角鲨烯不含任何化学成分和有毒物质，是一种新型、纯天然的保健品前原料。在加入活化好的酵母菌液体菌种之前加入了麸皮和红糖，其作用是让酵母菌能够在培养液中良好生长。经GC-MS定性检测，检测结果如图1所示，图1中，上部分是角鲨烯标准品图，下部分是山杏叶提取物图，经过比对，确定提取物为角鲨烯。经过GC-MS定性检测和后期气相色谱法定量分析如图2或3所示，5分钟左右的峰是角鲨烯的峰），确定本发明获得的提取物角鲨烯含量为3.67%。附图说明[0024]下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。[0025]图1为角鲨烯标品（上图）及山杏叶提取物下图GC-MS检测图；[0026]图2为角鲨烯标品气相色谱图；[0027]图3为山杏叶提取物气相色谱图；具体实施方式[0028]实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。[0029]实施例1:[0030]—种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：[0031]1原料准备:选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干至含水量为10%〜15%，粉碎成山杏叶粉;山杏叶为秋天每年阳历8月底到11月初落叶，粉碎至80目，取l〇〇g。[OO32]⑵固体发酵:向步骤⑴的山杏叶粉内加入lg麸皮和1.5g红糖，接入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物;接入活化好的酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的5%，固体发酵为25°C下发酵培养6天。[0033]3有机溶剂浸提:在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提1次;有机溶剂为3〇〜6〇°C的石油醚，山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:2。[0034]4水浴加热:将步骤¾中浸提的液体包括山杏叶发酵物和有机溶剂混合物料）在5〇°C水浴环境下加热1小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；[0035]5过滤:对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；[0036]⑹浓缩:将步骤⑸所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物0.20g，旋转蒸发是在60°C真空条件下进行。[0037]该山杏叶角鲨烯粗提物可以用来生产保健食品。[0038]实施例2:[0039]—种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：[0040]⑴原料准备:选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干至含水量为丨0%〜15%，粉碎成山杏叶粉；山杏叶为秋天每年阳历8月底到11月初落叶，粉碎至12〇目，取1〇〇g。[0041]2固体发酵：向步骤1的山杏叶粉内加入lg麸皮和1.5g红糖，接入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物;接入酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的30%，固体发酵为301；下发酵培养15天。[0042]3有机溶剂浸提:在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提2次;有机溶剂为60〜90°C的石油醚。山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:；1〇。[0043]4水浴加热:将步骤3中浸提的液体包括山杏叶发酵物和有机溶剂混合物料）在70°C水浴环境下加热4小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化，一旦温度超过70°C，角鲨烯会迅速氧化，保证温度不可以超过70r为宜；[0044]5过滤:对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；[0045]6浓缩:将步骤⑸所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物〇•25g，旋转蒸发是在9〇°C真空条件下进行。[0046]该山杏叶角鲨烯粗提物可以用来生产保健食品。[0047]实施例3:[0048]—种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：[0049]⑴原料准备:选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干至含水量为10%〜15%，粉碎成山杏叶粉；山杏叶为秋天年阳历8月底到11月初落叶，粉碎至100目，取100g。[0050]2固体发酵：向步骤⑴的山杏叶粉内加入lg麸皮和1.5g红糖，接入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物;接入酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的20%，固体发酵为28°C下发酵培养10天。[0051]3有机溶剂浸提:在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提丨次;有机溶剂为环己烷。山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:6。[0052]⑷水浴加热:将步骤⑶中浸提的液体饱括山杏叶发酵物和有机溶剂混合物料）在6〇°C水浴环境下加热3小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨燦不被氧化；~[0053]5过滤:对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；[0054]6浓缩:将步骤5所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鳘烯粗提物0.28g，旋转蒸发是在80°C真空条件下进行。〜[0055]该山杏叶角鳘烯粗提物可以用来生产保健食品。[0056]实施例4:[0057]—种山杏叶角鳘烯的制备方法，包括以下步骤：[0058]1原料准备:选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴千至含水量为1〇%〜15%，粉碎成山杏叶粉；山杏叶为秋天每年阳历8月底到11月初落叶，粉碎至9〇目，取丨〇〇g。[0059]⑵固体发酵：向步骤⑴的山杏叶粉内加入lg麸皮和1.5g红糖，接入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物;接入酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的20%，固体发酵为28°C下发酵培养15天。_0]⑶有机溶剂浸提:在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提!次;有机溶剂为6〇〜9〇°〇的石油醚。山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:6。[0061]⑷水浴加热:将步骤⑶中浸提的液体泡括山杏叶发酵物和有机溶剂混合物料）在55°C水浴环境下加热3小时，促进山杏叶发酵物中角鳘烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；~[0062]5过滤:对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；[0063]⑹浓缩:将步骤⑸所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨稀粗提物〇.23g，旋转蒸发是在75°C真空条件下进行。~[0064]该山杏叶角鲨烯粗提物可以用来生产保健食品。[0065]实施例5:[0066]—种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：[0067]1原料准备:选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干至含水量为10%〜I5%，粉碎成山杏叶粉；山杏叶为秋天每年阳历8月底到11月初落叶，粉碎至丨丨〇目，取丨00g。[0068]2固体发酵：向步骤（1的山杏叶粉内加入lg麸皮和丨.^红糖，接入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物;接入酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、栽皮和红糖混合物总质量的10%，固体发酵为3TC下发酵培养10天。[0069]3有机溶剂浸提:在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提丨次;有机溶剂为6〇〜9〇°〇的石油醚。山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:6。[0070]⑷水浴加热:将步骤⑶中浸提的液体饱括山杏叶发酵物和有机溶剂混合物料）在55°C水浴环境下加热3小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；[0071]⑸过滤:对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；[0072]6浓缩:将步骤5所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物0.22g，旋转蒸发是在65°C真空条件下进行。[0073]该山杏叶角鲨烯粗提物可以用来生产保健食品。[0074]以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质上对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。

权利要求：1.一种山杏叶角鲨烯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1原料准备:选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干，粉碎成山杏叶粉；2固体发酵：向步骤（1的山杏叶粉内加入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；⑶有机溶剂浸提:在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提1〜2次；⑷水浴加热:将步骤3中浸提的液体在50〜7TC水浴环境下加热1〜4小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；⑸过滤:对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；6浓缩:将步骤5所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物。2.根据权利要求1所述的山杏叶角鲨烯的制备方法，其特征在于，步骤（1所述的山杏叶为秋天落叶，粉碎至80〜120目。3.根据权利要求1所述的山杏叶角鲨烯的制备方法，其特征在于，步骤2所述的活化好的酵母菌液体菌种为酿酒酵母菌在PDA液体培养基中培养30h，在活化好的酵母菌液体菌种加入之前，加入麸皮和红糖的混合物，接入活化好的酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的5〜30%，所述的固体发酵为25〜3TC下发酵培养6〜I5天。4.根据权利要求1所述的山杏叶角鲨烯的制备方法，其特征在于，步骤3中所述的有机溶剂为30〜60°C的石油醚、㈤〜9〇°C的石油醚或环己烷中任意一种。5.根据权利要求1所述的山杏叶角鲨烯的制备方法，其特征在于，步骤3中山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:2〜1〇。6.根据权利要求1所述的山杏叶角鲨烯的制备方法，其特征在于，步骤4中所述的需要保持角鲨烯不被氧化是通过控制温度不超过70°C实现。、7.根据权利要求1所述的山杏叶角鳘烯的制备方法，其特征在于，步骤6中所述的旋转蒸发是在60〜9TC真空条件下进行。8.—种如权利要求1〜7任一项所述的山杏叶角鳘烯的应用，其特征在于，将山杏叶角鲨烯粗提物生产保健食品。

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