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摘要：本发明提供一种利用Fe3O4‑SiO2‑HPG磁性纳米粒子为载体固定化ROL脂肪酶用于制备OPO的方法。OPO结构脂有助于改善婴儿的营养吸收和健康发展，广泛应用于配方奶粉和其他食品中。但是，如今中国婴幼儿奶粉的产品市场仍依赖西方进口来维持，为提高中国乳品产品的占有率，满足国内市场需求并走向国际，就需要提高OPO的产率。以棕榈酸和油酸为底物酶法催化生产是制备OPO的有效途径。黑龙江省是非转基因大豆油的重要产地，其中含有丰富的油酸是制备OPO的理想原料。目前常用的酶法制备OPO方法存在不易分离、稳定性差等问题，基于磁性纳米粒子为载体固定化酶是实现OPO工业化生产的重大突破。利用超支化缩水甘油官能化磁性Fe3O4纳米粒子，增加酶结合位点，通过优化固定化条件和OPO制备条件，从而实现OPO连续化高效生产对于食品行业具有重要意义。

主权项：1.一种以Fe3O4-SiO2-HPG磁性纳米粒子为载体固定化ROL脂肪酶用于制备OPO的方法，通过以下步骤实现：步骤一：Fe3O4磁性纳米粒子的制备；称取9.72gFeCl3·7H2O和5.42gFeCl2·6H2O放入烧杯中，向其中加入500mL的蒸馏水，然后超声20min后，将烧杯放置在80℃下水浴磁力搅拌30min，向溶液中加入浓氨水，调整pH到10，继续搅拌60min，停止搅拌，使用磁性分离器，将产物分离，获得Fe3O4磁性纳米粒子。步骤二：磁性固定化载体的制备；将1.0gFe3O4磁性纳米粒子与10mL的TEOS和4mL的Tween20混合，超声10min，放入50mL的蒸馏水，超声10min。加入20mL浓氨水和60mL乙醇后，在35℃下充分搅拌2h，获得Fe3O4-SiO2磁性纳米粒子，用磁性分离器分离磁性载体。取1.0gFe3O4-SiO2与30μL甲醇溶液和2.5mL二甲基甲酰胺混合在50℃反应1h，去除甲醇后加入10mL的无水二氧六环，95℃加热，缓慢向容器内滴加2.0g超支化缩水甘油HPG，反应2h，用甲醇冲洗，用磁性分离器分离并烘干12h。制备得到Fe3O4-SiO2-HPG磁性纳米粒子。步骤三：固定化酶的制备；将1.0gFe3O4-SiO2-HPG与1.0g三乙胺和100mL二甲基甲酰胺混合，加入一定量的酸酐，充分搅拌，生成Fe3O4-SiO2-HPG-COOH放入烘箱中真空干燥12h备用。将1.0gFe3O4-SiO2-HPG-COOH载体与一定量脂肪酶ROL6、8、10、12、14％混合，移入pH分别为6、6.5、7、7.5、8的PBS缓冲液，摇床分转速为190rmin，分别在25、30、35、40、45℃下反应1、3、5、7、9h。反应结束后使用磁性分离器收集固定化酶ROL@Fe3O4-SiO2-HPG-COOH，用蒸馏水反复冲洗三次，烘干12h后以备后续使用。步骤四：OPO的制备；分别称取不同比例1:1、1:3、1:5、1:7、1:9的底物棕榈酸甘油三酯PPP和油酸OA，加入圆底烧瓶，加入6、8、10、12、14％底物重量的磁性固定化脂肪酶作为催化剂，加入5mL正己烷作为溶剂，混合均匀，在25、30、35、40、45℃下经过酸解反应2、4、6、8、10h制备OPO结构脂。

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