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一种传染性造血器官坏死病毒-杀鲑气单胞菌载体二联疫苗的构建方式 

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摘要:传染性造血器官坏死病病毒Infectioushematopoieticnecrosisvirus,IHNV和杀鲑气单胞菌Aeromonassalmonicida是虹鳟的两种重要病原,为了解决上述两种主要病原对虹鳟养殖业的威胁,本研究以杀鲑气单胞菌作为载体,表达IHNVG蛋白,构建针对IHNV和杀鲑气单胞菌两种病原的多联疫苗,并对其免疫保护效果进行了分析,以期为我国虹鳟养殖健康提供技术支持,本发明为首个能达到100%免疫的传染性造血器官坏死病毒‑杀鲑气单胞菌载体二联疫苗。

主权项:1.一种传染性造血器官坏死病毒-杀鲑气单胞菌载体二联疫苗的构建方式,其特征在于,构建方式如下:a.根据J型IHNV-G蛋白基因序列序列号:MT242597,以杀鲑气单胞菌基因组密码子偏好性进行密码子优化并合成优化基因IHNV-G-A;b.设计优化后的IHNV-G蛋白基因片段的引物序列;c.以优化基因IHNV-G-A作为PCR模板扩增IHNV-G蛋白基因;d.扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳检测、回收并连接到pGEX-4T-1载体和测序验证,得到IHNVG蛋白表达质粒pGEX-4T-1-G;e.用电转化法将重组质粒pGEX-4T-1-G转入感受态细胞SC18032201,得到转化成功的阳性转化子SC18032201-G;f.在最佳诱导表达条件下诱导SC18032201-G表达重组蛋白,使用5‰甲醛灭活24小时,用PBS稀释至终浓度约1×109cellmL,以MontanideTMISA763AVG为佐剂,制备油乳化疫苗。

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百度查询: 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种传染性造血器官坏死病毒-杀鲑气单胞菌载体二联疫苗的构建方式

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