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一种检测植物蛋白质亚细胞定位表达载体及其应用 

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摘要:本发明提出一种检测植物蛋白质亚细胞定位表达载体,包括特异性定位于细胞核中的红色荧光蛋白NLS‑DsRed2表达盒和根据目标蛋白特性定位的绿色荧光蛋白eGFP的融合表达盒DNA分子。本发明将出发载体I的eGFP表达盒替换为增强的NLS‑DsRed2表达盒,随后在含有增强的eGFP表达盒的出发载体II的基础上,同向插入增强的NLS‑DsRed2表达盒而获得终载体pCAMBIA1300‑NLS‑DsRED2‑eGFP。将待分析目的基因序列克隆入载体eGFP表达盒的MCS位点,获得的重组质粒可用于检测其亚细胞定位。在激光共聚焦荧光显微镜下,红色荧光信号定位在细胞核中,绿色荧光信号根据目标蛋白特性定位,成像效果清晰、稳定,且相互独立。

主权项:1.一种检测植物蛋白质亚细胞定位表达载体,其特征在于,包括特异性定位于细胞核中的红色荧光蛋白NLSNuclearlocalizationsignal-DsRed2表达盒和根据目标蛋白特性定位的绿色荧光蛋白eGFP的融合表达盒DNA分子,所述的双表达盒DNA分子由(1)和(2)组成:(1)由SuperPromoter启动子序列、COR47-5′UTR序列、MCS位点、细胞核定位信号NLS序列、红色荧光蛋白DsRed2编码区序列和终止子HSP-T878序列依次顺序连接组成的表达盒;(2)由2×35S启动子序列、COR47-5′UTR序列、MCS位点、绿色荧光蛋白eGFP编码区序列和终止子HSP-T878序列依次顺序连接组成的表达盒。

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