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申请/专利权人：江南大学

摘要：本发明涉及一种PhC耦合FRET的无酶miRNA多靶标检测方法，属于分析化学和生物医学技术领域。本发明设计了不同反射光颜色的光子晶体PhC作为多靶标检测的载体，结合特异性识别靶标的发夹序列，能够同步光学检测多种miRNA，如用于乳腺癌中过表达的miRNA‑21、miRNA‑155和miRNA‑10b的检测。具体地，通过将荧光供体发夹链固定在PhC上，当特异型识别靶标miRNA后，miRNA触发无酶扩增反应，导致荧光供体发夹与荧光受体发夹形成双链进而产生荧光共振能量转移FRET，将FRET比率与miRNA浓度相关联，可实现对样品中miRNA浓度的检测，而确定具体的miRNA则是通过不同PhC反射光颜色实现的。该方法具有高灵敏度、序列特异性和多目标检测能力，且可用于未经处理的血清miRNA含量的测定。

主权项：1.一种miRNA检测系统在制备miRNA检测产品中的应用，其特征在于，所述miRNA检测系统中包括供体探针、受体探针和光子晶体，所述应用包括以下步骤：S1、将供体探针与受体探针分别制备成发夹结构；S2、将供体探针固定于光子晶体上，与所述受体探针和已知浓度的miRNA靶标孵育，进行无酶扩增；S3、扩增完成后进行荧光共振能量转移检测，建立荧光强度比值与miRNA靶标含量的关系曲线；S4、将待测样本重复步骤S1～S3，通过待测样本的荧光强度比值计算得到miRNA靶标的含量，根据miRNA靶标的含量得出诊断结果；所述miRNA靶标包括一种或多种miRNA，所述供体探针包括一种或多种第一探针，所述受体探针包括一种或多种第二探针，不同第一探针和第二探针分别根据不同miRNA靶标设计；所述光子晶体为一种或多种，且多种光子晶体反射光的颜色不同；所述供体探针固定于光子晶体上，当检测多种miRNA靶标时，不同第一探针分别固定于具有不同颜色反射光的光子晶体上；所述第一探针上设有连接序列、第一序列、第二序列、第三序列、第四序列和连接序列，所述第二探针上设有序列A、序列B和序列C，且：所述第二序列与序列C互补，所述第三序列与序列B互补，所述miRNA靶标与第三序列和第四序列互补，所述第一序列的长度为10-14个碱基，所述序列A的长度为9-13个碱基，所述第二探针与第一探针的结合自由能低于所述miRNA靶标与第一探针的结合自由能；所述第一探针上靠近第一序列的一端修饰有供体荧光分子，另一端与光子晶体连接，所述第二探针上靠近序列C的一端修饰有受体荧光分子。

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百度查询： 江南大学 一种PhC耦合FRET的无酶miRNA多靶标检测方法