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申请/专利权人：浙江工业大学
摘要：本发明公开一种腈水解酶交联酶聚集体及其制备方法与应用，本发明采用粗酶液制备腈水解酶CLEAs，制备过程包括沉淀、聚集、交联、稳定四步，操作过程简单，降低了成本，更容易放大生产，不依赖设备。本方法制备的AcN‑T腈水解酶CLEAs催化剂酶活回收率高达60％，可连续催化200mM底物1‑氰基环己基已腈完全转化45批，具有较好的批次稳定性。本发明提供的方法制备的固定化酶可对催化不同底物合成对应的产物，可耐受高底物浓度并对底物实现完全的转化。本发明提供的方法制备的固定化酶具有较高的催化活性和极佳的操作稳定性，在温和条件下也能高效制备医药化学品或降解腈类物质，有较大的工业价值。
主权项：1.一种腈水解酶交联酶聚集体，其特征在于，所述腈水解酶交联酶聚集体按如下步骤制备：1将含腈水解酶编码基因的工程菌经培养后得到湿菌体悬浮于pH6-8磷酸钠缓冲液中，超声破碎，离心，收集上清，获得腈水解酶粗酶液；2在35℃恒温水浴条件下，向粗酶液中加入沉淀剂，静置10min使蛋白沉淀；再加入表面活性剂，静置10min使蛋白聚集；然后加入交联剂，600rpm反应0.5-3h使蛋白交联；最后加入稳定剂，600rpm反应10min使蛋白稳定，反应液用水洗涤3-5次，离心，收集沉淀，得到腈水解酶交联酶聚集体；所述沉淀剂为硫酸铵、乙腈、乙醇、丙酮中的一种；所述稳定剂为牛血清白蛋白、色氨酸、赖氨酸、酪氨酸中的一种。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江工业大学 腈水解酶交联酶聚集体及其制备方法与应用
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