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申请/专利权人：北京亿森宝生物科技有限公司

摘要：本发明涉及微生物检测技术领域，具体公开了一种同时检测禽滑液囊支原体野毒和疫苗的方法、产品及应用。本发明检测禽滑液囊支原体野毒和疫苗的方法采用RAA‑CRISPRCAS12aCAS13a技术，在同一反应体系中对待测样品核酸进行扩增后，可实现对禽滑液囊支原体野毒和疫苗的同时检测，反应体系包括：分别如SEQIDNo.1和2所示的禽滑液囊支原体野毒株上下游引物、分别如SEQIDNo.4和5所示的禽滑液囊支原体疫苗株上下游引物、如SEQIDNo.3所示的Cas12a‑crRNA和如SEQIDNo.6所示的Cas13a‑crRNA。本发明方法可通过同一反应体系实现禽滑液囊支原体野毒株和疫苗株的同时检测，特异性好，敏感度佳。

主权项：1.一种非疾病诊断或治疗目的的检测禽滑液囊支原体野毒和疫苗的方法，其特征在于，所述方法采用RAA-CRISPRCAS12aCAS13a技术，在同一反应体系中对待测样品核酸进行扩增后，可实现对禽滑液囊支原体野毒和疫苗的同时检测，所述反应体系包括：禽滑液囊支原体野毒株上、下游引物、禽滑液囊支原体疫苗株上、下游引物、Cas12a-crRNA和Cas13a-crRNA；所述禽滑液囊支原体野毒株上、下游引物的序列分别如SEQIDNo.1和2所示，所述禽滑液囊支原体疫苗株上、下游引物的序列分别如SEQIDNo.4和5所示；所述Cas12a-crRNA的序列如SEQIDNo.3所示，所述Cas13a-crRNA的序列如SEQIDNo.6所示；所述反应体系还包括：LbCas12a蛋白、LbCas13a蛋白、ssDNA和ssRNA；所述ssDNA和ssRNA分别标记有产生不同荧光色的荧光基团；未标记前的ssDNA的序列如SEQIDNo.19所示，未标记前的ssRNA的序列为UUUUUUUU，所述荧光基团包括荧光报告基团和荧光猝灭基团；所述反应体系中，LbCas12a蛋白和Cas12a-crRNA的浓度比为（0.8-1.2）：1.4；LbCas13a蛋白和Cas13a-crRNA的浓度比为（2.2-6.2）：（0.4-0.8）；禽滑液囊支原体野毒株上游引物或下游引物与ssDNA的浓度比为（2200-6200）：（30-70）；禽滑液囊支原体疫苗株上游引物或下游引物与ssRNA的浓度比为（2200-6200）：（12-52）。

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