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申请/专利权人：浙江大学

摘要：本发明公开了一种茶树组培苗高效继代增殖方法，通过外植体的选择、外植体的灭菌与消毒、不定芽诱导培养、不定芽增殖培养、继代芽复壮增殖以及丛生芽循环再生的操作步骤，并采用专门研制的不定芽诱导培养基、增殖培养基和无外源激素添加培养基进行培养，有效提高茶树愈伤组织的抗褐化能力，显著提高组培苗在连续继代培养中的增殖效果，在较短时间内获得继代增殖系数高、活力旺盛、不易老化的不定芽材料，为建立高效的茶树离体快繁体系奠定基础。

主权项：1.一种茶树组培苗高效继代增殖方法，其特征在于，包括以下步骤：1选取无病虫害的茶树实生苗，自顶端向下剪取带芽嫩茎作为茶树外植体；2对茶树外植体进行杀菌消毒处理；其具体为：将茶树外植体置于超净工作台，第一次先用75％酒精浸泡处理30-40秒，升汞浸泡并搅拌6-8分钟，用无菌水冲洗3-5次；第二次再用0.1％升汞消毒6-8分钟，用无菌水冲洗3-5次；3将杀菌消毒后的茶树外植体按照生物学下端接种到不定芽诱导培养基中培养25-30d；4切取培养后茶树外植体的不定芽，将切取到的不定芽转接至增殖培养基中进行继代增殖培养，培养30-35d，形成丛生芽；5将丛生芽切成多个芽块，每个芽块有3-4个小芽，将芽块转接到无外源激素添加培养基上培养；培养至芽块分化为小植株；所述小植株在退激素的同时基部又分化出从生芽，且从生芽随培养时间的延长而伸长；6将步骤5中小植株的丛生芽分割成单芽后转接到增殖培养基进行继代增殖培养，直至形成丛生芽；7重复上述步骤5—6，直到达到需要的育苗数量；所述增殖培养基的配方为：基础培养基+1-1.5gL的花多多1号+0.5-1mgL的ZT+2-4mgL的2iP+2-4mgL的AMP+0.1-0.5mgL的IBA+6-10mgL的尿囊素+25-30gL的蔗糖+4.5-5.5gL的琼脂粉，并调节pH至5.7-6.0；所述基础培养基的溶剂为去离子水，基础培养基的配方为：79.43mgL的KNO3、372.2mgL的KH2PO4、795.91mgL的KCl、227.97mgL的NH4H2PO4、471.2mgL的CaNO32·4H2O、185mgL的MgSO4·7H2O、3.1mgL的H3BO3、11.15mgL的MnSO4·4H2O、4.3mgL的ZnSO4·4H2O、0.415mgL的KI、0.125mgL的Na2MoO4·2H2O、0.0125mgL的CuSO4·5H2O、0.0125mgL的CoCl2·6H2O、13.9mgL的FeSO4·7H2O、18.7mgL的Na2-ETDA、50mg的肌醇L、0.25mgL的烟酸、0.5mgL的维生素B1、0.5mgL的维生素B6。

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