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申请/专利权人：重庆博视知识产权服务有限公司

摘要：透明质酸酶HAase与许多恶性肿瘤密切相关。研究表明，HAase浓度在膀胱癌患者的尿液中显著增高，使其成为膀胱癌早期诊断与治疗的重要生物标志物之一。本发明提出了一种采用空心金纳米材料构建基于HAase‑HA生物识别作用的纳米复合材料进行自催化循环放大反应用于检测HAase的方法。该方法不但使检测体系得到优化和改进，而且，最大程度地提高了检测灵敏度、简化了检测过程、降低了检测成本、拓宽了应用领域，解决了活体、细胞成像技术复杂、价格居高、灵敏度不足等难题，尤为重要的是，本发明无需采用任何工具酶就能获得信号的循环放大效果，为体内外检测、活体及细胞成像等领域提供新的技术和方法。

主权项：1.一种检测透明质酸酶HAase的非诊断目的的方法，其特征在于：该方法采用的纳米复合材料是基于HAase-HA生物识别作用及自催化循环放大策略，所述的纳米复合材料采用细胞毒性低、生物相容性好的空心金纳米材料载带信号分子，利用透明质酸HA作为生物识别分子构建分子锁；所述的分子锁是通过HA与带有氨基和巯基的聚乙二醇反应制得复合物HA-PEG-SH，然后再与空心金纳米材料反应构建而成；所述的信号分子是罗丹明B；所述的纳米复合材料的制备方法，包括如下步骤：1用pH=7.4的PBS缓冲溶液清洗20μL巯基磁珠后，加入空心金纳米载体溶液200μL，37oC摇床反应12.0h；2磁分离、清洗后加入终浓度为1.0×10-5molL的RhB的PBS溶液100μL，37oC摇床反应12.0h；3磁分离、清洗后制得纳米载体复合物，保存备用；4在0.5mL100mgmLHA水溶液中加入200μL13mgmL羰基二咪唑的DMF溶液，室温反应2.0h后，加入100μL含有25mgNH2-PEG-SH的水溶液和10μL三甲胺溶液，搅拌过夜；5经透析膜纯化，冷冻干燥，制得复合物HA-PEG-SH；6将0.5mL2.4mgmLHA-PEG-SH的水溶液加入到步骤3制得的纳米载体复合物中，常温搅拌2.0h；7磁分离、清洗，最终制得用于检测HAase的纳米复合材料；该方法包括以下步骤：（1）取样本20μL，加入到所述的纳米复合材料中，37oC摇床反应4.0h；（2）磁分离，取上清液用PBS缓冲溶液稀释至200μL，并用0.1molL的盐酸溶液调pH为5.0进行荧光检测。

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百度查询： 重庆博视知识产权服务有限公司 一种检测肿瘤患者尿液生物标志物的方法