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申请/专利权人:尚科生物医药(上海)有限公司
摘要:本发明公开了一种NMNAT‑Ppase共固定化酶的制备方法及其在辅酶I生产工艺中的应用。本发明公开的NMNAT‑Ppase共固定化酶的制备方法主要为,中性条件下,将NMNAT酶通过酶上的氨基与氨基环氧载体中的环氧官能团反应,并使用封闭剂对氨基环氧载体上未反应的环氧官能团进行封闭,得到链接了NMNAT酶的载体;然后将其加到戊二醛水溶液中,通过席夫碱反应对载体进行修饰;再将修饰后的载体加入到Ppase酶液中,在特定温度和反应时间下,通过席夫碱反应将Ppase酶固定化;最后将已经链接了NMNAT酶和Ppase酶的载体在还原剂作用下进行还原反应得到NMNAT‑Ppase共固定化酶。本发明通过制备NMNAT‑Ppase共固定化酶并将其应用于辅酶I的生产工艺中,解决了辅酶I生产效率低、成本高和无法实现连续化的问题。
主权项:1.一种NMNAT-Ppase共固定化酶的制备方法,其特征在于,所述制备方法的反应方程式如下所示, 其中表示氨基环氧载体,表示NMNAT酶,表示Ppase酶,制备方法具体包括如下步骤:1中性条件下,将NMNAT酶通过酶上的氨基与氨基环氧载体中的环氧官能团反应,并使用封闭剂对氨基环氧载体上未反应的环氧官能团进行封闭,得到链接了NMNAT酶的载体;2将步骤1中得到的已经链接了NMNAT酶的载体加到戊二醛水溶液中,通过席夫碱反应对载体进行修饰;3将步骤2中经过戊二醛修饰的已经链接了NMNAT酶的载体加入到Ppase酶液中,在特定温度和反应时间下,通过席夫碱反应将Ppase酶固定化;4将步骤3中得到的已经链接了NMNAT酶和Ppase酶的载体在还原剂作用下进行还原反应,得到NMNAT-Ppase共固定化酶。
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