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申请/专利权人：华南理工大学

摘要：本发明公开一种高产β‑熊果苷的毕赤酵母工程菌及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明提供一种β‑熊果苷合成能力提高的毕赤酵母菌株，通过引入β‑熊果苷合成途径，在HIS位点构建底物通道，在Int1位点组合过表达莽草酸途径关键基因，经过甲醇浓度优化后，有效提高β‑熊果苷产量到（6.33gL），较初始量（1.57gL）提高了3.03倍，且在5L发酵罐中熊果苷的产量达到128.6gL，产率为1.33ggDCW。本发明的制备方法具有转化效率高、生产成本低、制备方便、工业化应用前景广等特点。

主权项：1.一种高产β-熊果苷的毕赤酵母工程菌，其特征在于：是对毕赤酵母出发菌株进行以下任一种操作后得到：（b）异源表达UbiC基因和MNX1LAS基因；或，（d）异源表达UbiC基因、MNX1LAS基因，同时过表达DHAPS2基因；或，（e）异源表达UbiC基因、MNX1LAS基因，同时过表达DHAPS3基因；或，（f）异源表达UbiC基因、MNX1LAS基因，同时过表达AroM基因；或，（g）异源表达UbiC基因、MNX1LAS基因，同时过表达CRS基因；或，（h）异源表达UbiC基因、MNX1LAS基因，同时过表达DHAPS3基因、DHAPS2基因；或，（i）异源表达UbiC基因、MNX1LAS基因，同时过表达DHAPS3基因、AroM基因；或，（j）异源表达UbiC基因、MNX1LAS基因，同时过表达DHAPS3基因、CRS基因；或，（k）异源表达UbiC基因、MNX1LAS基因，同时过表达DHAPS3基因、AroM基因、CRS基因；所述的UbiC基因编码的氨基酸序列如NP_418463.4所示；所述的UbiC基因的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；所述的MNX1基因编码的氨基酸序列如XP_036663424.1所示；所述的MNX1基因的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示；所述的AS基因编码的氨基酸序列如CAC35167.1所示；所述的AS基因的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示；所述的DHAPS2基因编码的氨基酸序列如XP_002491383.1所示；所述的DHAPS3基因编码的氨基酸序列如XP_002493176.1所示；所述的AroM基因编码的氨基酸序列如XP_002492733.1所示；所述的CRS基因编码的氨基酸序列如XP_002491561.1所示；所述的MNX1LAS为将MNX1与AS融合得到的MNX1LAS；接头选择为GGGS；UbiC基因、MNX1LAS基因、AroM基因均由诱导型启动子AOX1诱导表达；DHAPS2基因、DHAPS3基因、CRS基因均由诱导型启动子AOXm诱导表达；所述诱导型启动子AOX1为来源于毕赤酵母的诱导型启动子AOX1；所述诱导型启动子AOXm的核苷酸序列如中国专利申请号为CN202211018368.1中的SEQIDNO：3所示；UbiC基因、MNX1LAS基因、AroM基因均用His4位点整合；DHAPS2基因、DHAPS3基因、CRS基因均用Int1位点整合。

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