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申请/专利权人：北京理工大学
摘要：本申请公开了一种基于FRET原位检测酵母表面展示寡聚酶四级结构的方法，包括：以酿酒酵母为底盘菌株，敲除基因PPQ1、ALO1、NAM7和GAL80，引入多拷贝的酪氨酰‑tRNA合酶和tRNACUATyr；选择寡聚酶界面处的位点分别突变成半胱氨酸和TAG密码子，使用锚定蛋白介导寡聚酶的酿酒酵母表面展示；通过添加半乳糖和对叠氮基‑苯丙氨酸发酵，诱导蛋白表达；添加Cy3‑马来酰亚胺用于偶联酵母表面展示寡聚酶的半胱氨酸，添加Cy5‑DBCO用于偶联酵母表面展示寡聚酶的叠氮基团；使用共聚焦显微镜表征供体、受体和FRET信号。本发明无需从酵母细胞表面分离展示的寡聚酶，能够在细胞表面原位检测寡聚酶的四级结构。
主权项：1.一种基于FRET原位检测酵母表面展示寡聚酶四级结构的方法，其特征在于，包括：1以酿酒酵母为底盘菌株，敲除基因PPQ1、ALO1、NAM7和GAL80，并同时引入多拷贝的酪氨酰-tRNA合酶OmeRS和其对应的tRNACUATyr；2选择寡聚酶界面处的位点分别突变成半胱氨酸和TAG密码子，使用锚定蛋白介导寡聚酶的酿酒酵母表面展示；通过添加半乳糖和对叠氮基-苯丙氨酸pAzF发酵，诱导蛋白表达；3添加供体荧光分子Cy3-马来酰亚胺用于偶联酵母表面展示寡聚酶的半胱氨酸，添加受体荧光分子Cy5-DBCO用于偶联酵母表面展示寡聚酶的叠氮基团；4使用共聚焦显微镜表征供体、受体和FRET信号；其中酪氨酰-tRNA合酶的基因序列如SEQIDNO.1所示，tRNACUATyr的序列如SEQIDNO.2所示或者SEQIDNO.3所示。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京理工大学 一种基于FRET原位检测酵母表面展示寡聚酶四级结构的方法
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