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申请/专利权人：玉溪市农业科学院(玉溪市柑桔科学研究中心)

摘要：本发明涉及一种掌叶覆盆子的组培快速繁殖方法，属于植物生物技术领域。该方法包括外植体采集、外植体灭菌、诱导培养、增殖培养、生根培养这5个步骤。本发明可以高效、快速、大量地培养出优质掌叶覆盆子组培苗，可满足掌叶覆盆子组培苗的市场需求，具有美好的市场前景，易于推广应用。

主权项：1.一种掌叶覆盆子的组培快速繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：A、外植体采集：在掌叶覆盆子生长季，于晴天中午，选取新生、半木质化、腋芽未萌发、生长健壮、无病虫害的枝条为采集对象，剪取枝条后并密封保存，于2.5～3.0h内带回组培室处理；B、外植体灭菌：将A步骤的枝条截断成0.8～1.0cm长的茎段，且每个茎段上附着长0.1～0.2cm的叶柄；用体积浓度为1.5％～2.5％的洗洁精水溶液浸泡茎段1.0～2.0min，然后无菌水浸洗茎段2～3次，接着将茎段灭菌；C、诱导培养：将经B步骤灭菌后的茎段接种到诱导培养基中培养，当培养出生长健壮的芽时，完成诱导培养；所述的诱导培养基为：基础培养基MS+6-苄氨基嘌呤0.5～0.8mgL+萘乙酸0.01～0.05mgL+柠檬酸300～400mgL+白砂糖25～30gL+琼脂粉5.5～5.8gL，pH为5.8～6.0；或诱导培养基为：基础培养基WPM+6-苄氨基嘌呤0.5～0.8mgL+萘乙酸0.01～0.05mgL+柠檬酸300～400mgL+白砂糖25～30gL+琼脂粉5.5～5.8gL，pH为5.8～6.0；D、增殖培养：将C步骤得到的芽从其与茎段的连接处切割分离出单株芽；将单株芽接种到增殖培养基中培养出健壮的丛芽，然后从丛芽中切分出单株芽，又接种单株芽到增殖培养基中，如此反复进行继代增殖培养；增殖培养的培养室温度25℃±2℃，相对湿度30%～45%，光照强度2500Lx～3000Lx，光照时间12～14hd；所述的增殖培养基为：基础培养基改良MS+6-苄氨基嘌呤0.5～1.0mgL+白砂糖25～30gL+琼脂粉5.5～5.8gL，pH为5.8～6.0；所述的改良MS是KNO3、NH4NO3、KH2PO4的含量分别为2200mgL、1400mgL、380mgL，其余成分浓度保持与基础培养基MS一致；或增殖培养基为：基础培养基MS+6-苄氨基嘌呤0.5～1.0mgL+白砂糖25～30gL+琼脂粉5.5～5.8gL，pH为5.8～6.0；E、生根培养：将D步骤得到的丛芽切分成单株芽，从中选取长1.5～2.1cm的单株芽接种入生根培养基中培养，得到种苗；生根培养的培养室温度25℃±2℃，相对湿度30%～45%，光照强度2500Lx～3000Lx，光照时间12～14hd，培养时间35～50d；所述的生根培养基为：基础培养基12MS+白砂糖25～30gL+琼脂粉5.5～5.8gL，pH为5.8～6.0；或生根培养基为：基础培养基12MS+活性炭0.1wt%～0.2wt%+白砂糖25～30gL+琼脂粉5.5～5.8gL，pH为5.8～6.0；或生根培养基为：基础培养基MS+白砂糖25～30gL+琼脂粉5.5～5.8gL，pH为5.8～6.0；或生根培养基为：基础培养基MS+活性炭0.1wt%～0.2wt%+白砂糖25～30gL+琼脂粉5.5～5.8gL，pH为5.8～6.0；或生根培养基为：基础培养基WPM+白砂糖25～30gL+琼脂粉5.5～5.8gL，pH为5.8～6.0；或生根培养基为：基础培养基WPM+活性炭0.1wt%～0.2wt%+白砂糖25～30gL+琼脂粉5.5～5.8gL，pH为5.8～6.0。

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