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申请/专利权人：中国水产科学研究院黄海水产研究所

摘要：本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及石斑鱼肠孢虫的检测引物和探针及其应用。本发明针对石斑鱼肠孢虫的SSUrRNA基因设计出引物及探针，建立了基于TaqMan‑MGB探针的实时荧光定量PCR和基于等温扩增技术的检测方法，该两种方法对目的基因的检测灵敏度分别为6.1和268拷贝反应，检测应用中还具有检测快速、特异和重复性好的优点。其中的等温扩增方法，可在恒温条件下20min内可完成检测并可目测判断结果，适用于病原的现场诊断和检测试剂盒开发。

主权项：1.一种石斑鱼肠孢虫的检测引物和探针，其特征在于：所述的引物和探针的核苷酸序列如下：（1）3套等温扩增引物的核苷酸序列：第一套引物组成及核苷酸序列：引物1：E.ep_F3_1：5’-AACACGATGATAAAAATCGTAGA-3’，引物2：E.ep_B3_1：5’-TGCTAGAATTACAGCGGTAT-3’，引物3：E.ep_FIP_1：5’-TCCAGGTAGAGTCTAGAGATTTCATTTTTTTTGCTAAATATTGCTAGCGG-3’，引物4：E.ep_BIP_1：5’-GAGGCGAAAGCGACGTTCTTTTTTCTAATCACTTTCAATACTCCAGC-3’，引物5：E.ep_LF_1：5’-CCTATACCACGTTCCCTATCCATT-3’，引物6：E.ep_LB_1：5’-AGACGTATCCGAGGGTCAAG-3’；第二套引物组成及核苷酸序列：引物1：E.ep_F3_2：5’-GGATAGTACAGCCGCAAG-3’，引物2：E.ep_B3_2：5’-TCCAACACTTAAGTTAAAGATCA-3’，引物3：E.ep_FIP_2：5’-CGTTGAGTTAAATTAAGCGGCATAATTTTACTGAAACTTAAACGATATTGGC-3’，引物4：E.ep_BIP_2：5’-GGAAAACTTACCAGGGTCAAGTTTTTTCATCAATTTACAACGGCCAT-3’，引物5：E.ep_LF_2：5’-TCCACTACTGGTGGTAAACTTCC-3’，引物6：E.ep_LB_2：5’-CATGAGATAAACGAGAGTGGTGC-3’；第三套引物组成及核苷酸序列：引物1：E.ep_F3_3：5’-ACGGTAACCTGTGGCTAA-3’，引物2：E.ep_B3_3：5’-CGTCTAATAAATGTCTCTTCTCAA-3’，引物3：E.ep_FIP_3：5’-CGTCACCCATTGTTGCCTTGTTTTGCGCAGTCCTATTATGTTTG-3’，引物4：E.ep_BIP_3：5’-AATCAGGGTTTGATTCCGGAGAGTTTTAAGTGGACAATTTTCGCG-3’，引物5：E.ep_LF_3：5’-GGAGTCCATTACACTACCAA-3’，引物6：E.ep_LB_3：5’-GGAGCCTGAGAGATGGC-3’；（2）荧光定量PCR检测引物及探针核苷酸序列：引物1：E.ep_F：5’-ACGTCCGTAGCTGTAGATGCAA-3’，引物2：E.ep_R：5’-CCTCTGTTGGTCCAGGTAGAGTC-3’，探针：E.ep_P：5’-CGTGGTATAGGTAGACAAAG-3’。

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百度查询： 中国水产科学研究院黄海水产研究所 石斑鱼肠孢虫的检测引物和探针及其应用