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申请/专利权人：云南农业大学
摘要：本发明涉及生物防治技术领域，具体涉及一种基于GFP报告基因快速检测的莱氏绿僵菌遗传转化方法及应用，通过根癌农杆菌的转化成功将莱氏绿僵菌菌株SZCY201010中基因NOR_03153敲除。通过激光共聚焦荧光快速筛查，将挑选的转化子的成功转化率提高到30％NOR_03153，大量缩短了PCR验证的时间和成本。同时，还利用PCR、RT‑qPCR技术对真菌的转化子进行验证，验证了本技术的可靠性。
主权项：1.一种基于感受态芽孢与根瘤农杆菌共孵育的莱氏绿僵菌遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：构建敲除载体：准备含有GFP报告基因的pGTH载体，以及大肠杆菌菌株DH-5α用于构建和扩增二元载体；S2：转化目标细胞：通过AGL-1进行根瘤农杆菌质粒转化，通过接种真菌分生孢子进行感受态芽孢制作；S3：真菌遗传转化：进行农杆菌和感受态芽孢共孵育，计算转化率；S4：GFP快速检测：将筛选出的转化子接种在SMAY平板上培养；使用激光共聚焦显微荧光检测基因表达量，快速鉴定转化子。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 云南农业大学 一种基于GFP报告基因快速检测的莱氏绿僵菌遗传转化方法及应用
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