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摘要：本发明提供了一种用于食蟹猴精液质量评价的Sirt1mRNA表达的qPCR检测方法，属于检测方法，具体方法为以食蟹猴新鲜精液提取的总RNA逆转录合成得到的cDNA为模板，利用PCR引物组合进行实时荧光定量PCR扩增，获得SIRT1基因片段及内参基因GAPDH片段的Ct值及溶解峰、扩增效率，通过常规处理得均一化后的SIRT1基因倍数表达的ΔΔCt值，从而获得SIRT1基因转录水平相对表达值。为研究食蟹猴SIRT1功能以及相关药物对其影响提供了有效途径。本发明适用于实时定量PCR检测，其操作简单，可重复性高，检测成本低、灵敏性高、特异性强。
主权项：1.一种用于食蟹猴精液质量评价的Sirt1mRNA表达的qPCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1提取食蟹猴新鲜精液的总RNA，逆转录合成得食蟹猴cDNA第一链；2以步骤1获得的食蟹猴cDNA第一链为模板，分别以食蟹猴SIRT1基因的特异性引物、内参基因特异性引物进行实时荧光定量PCR扩增，扩增结束后根据荧光信号的数据，分别获得SIRT1基因及内参基因GAPDH的Ct值及溶解峰，建立SIRT1基因及内参基因GAPDH的标准曲线，得到SIRT1基因及内参基因GAPDH的扩增效率、斜率及R2值；所述食蟹猴SIRT1基因的特异性引物如下：SIRT1F：5’-TTTTCCATGGCGCTGAGCTA-3’SIRT1R：5’-CTTGGACTCTCGCATCTCCC-3’所述内参基因的特异性引物如下：GAPDHF：5’-AGCCCCATCACCATCTTCC-3’GAPDHR：5’-AATGAGCCCCAGCCTTCTC-3’；所述实时荧光定量PCR扩增体系以10μL计，包括：SYBRPremixExTaqII酶5μL，cDNA模板1μL，SIRT1F和SIRT1R各0.4μL，去离子水3.2μL；3根据步骤2中获得的Ct值以及扩增效率，计算SIRT1基因倍数表达的ΔΔCt值，从而获得SIRT1基因转录水平相对表达值。
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