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申请/专利权人：石河子大学
摘要：本发明属于基因工程技术领域，涉及一种结核杆菌小分子热休克蛋白Hsp16‑3以下简称Hsp16‑3过表达的结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌以下简称H37Ra菌菌株的构建及其应用。首次利用电穿孔技术，将构建的大肠杆菌‑结核杆菌重组穿梭质粒载体pMV361‑Hsp16‑3，转入H37Ra菌，筛选并鉴定，确定成功构建的菌株，为Hsp16‑3基因过表达的H37Ra菌株。本发明构建的Hsp16‑3过表达的H37Ra菌，增强了Hsp16‑3基因的表达，将提升H37Ra菌对机体的免疫反应，为探索研究Hsp16‑3对H37Ra菌的致病性、免疫保护作用等方面的调控作用，以及新型结核病疫苗研发奠定基础。
主权项：1.结核杆菌小分子热休克蛋白Hsp16-3以下简称Hsp16-3过表达的结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌以下简称H37Ra菌菌株的构建，其特征在于，包括以下步骤：步骤1.大肠杆菌-结核杆菌重组穿梭质粒载体pMV361-Hsp16-3的构建及鉴定首先，接种及培养结核杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株以下简称H37Rv菌；第二，提取和鉴定H37Rv菌基因组DNA；第三，以H37Rv菌基因组DNA为模板，PCR扩增结核杆菌小分子热休克蛋白Hsp16-3基因，并纯化和回收PCR扩增产物；第四，以大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV361为载体，构建及鉴定大肠杆菌-结核杆菌重组穿梭质粒载体pMV361-Hsp16-3；步骤2.Hsp16-3过表达的H37Ra菌株的构建及鉴定利用电穿孔技术，将构建的大肠杆菌-结核杆菌重组穿梭质粒载体pMV361-Hsp16-3，转入H37Ra菌内，经Realtime-PCR技术检测及鉴定，成功构建Hsp16-3过表达的H37Ra菌株。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 石河子大学 Hsp16-3过表达的结核分枝杆菌H37Ra菌株的构建及其应用
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