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申请/专利权人：上海墨卓生物科技有限公司

摘要：本发明公开了一种用于不同组织解离的试剂盒及其解离方法。所述试剂盒包括一种解离酶组合，解离酶组合包括解离酶A和解离酶B，或解离酶B和解离酶C；其中，所述解离酶A包括：0.1％II型胶原酶；所述解离酶B包括：0.1％II型胶原酶和0.1％IV型胶原酶；所述解离酶C包括：0.06％DispaseII。使用本发明提供的解离酶组合或试剂盒在解离时用时短，节约大量时间；解离时不用去除死细胞，可保留细胞多样性；解离后获得的细胞数目达百万以上，可在短时间内获取足量细胞。

主权项：1.一种利用试剂盒进行组织解离的方法，其特征在于，所述试剂盒包括解离酶组合、组织清洗液、细胞悬浮液、细胞激活因子、红细胞裂解液和碎片去除剂；所述解离酶组合由解离酶A和解离酶B组成；所述解离酶A为：0.1%II型胶原酶；所述解离酶B为：0.1%II型胶原酶和0.1%IV型胶原酶；所述组织清洗液包括137mMNaCl，5.4mMKCl，0.3mMNa2HPO4·2H2O，0.4mMKH2PO4，5.6mM葡萄糖，4.2mMNaHCO3，pH7.4；所述细胞悬浮液包括137mMNaCl，2.7mMKCl，4.3mMNa2HPO4，1.4mMKH2PO4，pH7.4；所述细胞激活因子为10%胎牛血清；所述红细胞裂解液包括150mMNH4Cl，10mMKHCO3和0.1mMEDTA，pH7.4；所述碎片去除剂为90%Percoll，溶于所述细胞悬浮液中；所述方法包括以下步骤：将组织碎块进行消化后再进行细胞收集；并且，使用以下方案：（1）将所述组织碎块与解离酶A混合，进行第一消化反应后分层，其中上层为上清1，下层为剩余的组织碎块1；（2）取所述剩余的组织碎块1与解离酶液B混合，进行第二消化反应后分层，其中上层为上清2，下层为剩余的组织碎块2；（3）取所述上清2与10%胎牛血清混合，或上清1与上清2与10%胎牛血清混合，降温孵育后过滤；所述组织碎块来自E18胎鼠的肺组织；所述组织碎块和解离酶A的重量体积比为（10-25）:1，所述重量体积比的单位为mgml；所述解离酶A和解离酶B的用量比为1:（1-5）；所述胎牛血清与所述解离酶B的用量比为1:（5-20）；所述细胞收集的步骤包括离心后使用红细胞裂解液重悬后，加入细胞悬浮液重悬；所述方法还包括在步骤（1）前，用组织清洗液清洗组织碎块，分层后获得下层处理后的组织碎块的步骤；所述组织碎块的尺寸为6-9mm3。

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