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申请/专利权人：桂林电子科技大学

摘要：一种基于RGO‑CMCS‑HeminPdNPs电化学传感器检测GPC3的方法，采用电沉积技术将AuNPs修饰在SPE表面，通过静电吸附作用将RGO‑CMCS‑HeminPdNPs复合材料负载在AuNPsSPE表面，再将EDCNHS活化剂孵育在电极表面，随后将GPC3适配体修饰在RGO‑CMCS‑HeminPdNPsAuNPsSPE电化学适配体传感器。利用电活性物质Hemin中铁离子的电子转移产生电流信号，GPC3的加入，蛋白与适配体特异性结合影响了电子传递速率，采用电化学工作站的DPV进行扫描，记录其电流响应峰值，绘制工作曲线，实现对GPC3的高灵敏检测。该方法操作简便、耗时短、检测费用低，最低检测限为9.898ngmL。

主权项：1.一种非诊断目的基于还原氧化石墨烯-羧甲基壳聚糖-氯化血红素纳米钯RGO-CMCS-HeminPdNPs复合材料的电化学适配体传感器检测GPC3的方法，按以下步骤进行：步骤1：RGO-CMCS-HeminPdNPs复合材料的制备（1）还原性氧化石墨烯RGO的制备：将30.0mg氧化石墨烯GO分散于30.0mL蒸馏水中，超声破碎2h，加入90.0mg抗坏血酸AA还原，得1.0mgmL的RGO悬浮液；（2）还原性氧化石墨烯-氯化血红素RGO-Hemin的制备：称取10.0mg的氯化血红素Hemin，加入20.0µL氨水，再加入10.0mL蒸馏水，得到1.0mgmL的Hemin溶液；取10.0mL1.0mgmL的RGO悬浮液，加入10.0mLHemin溶液，混匀后超声破碎，获得1.0mgmL的RGO-Hemin悬浮液；（3）还原性氧化石墨烯-羧甲基壳聚糖-氯化血红素RGO-CMCS-Hemin的制备：称取50.0mg的羧甲基壳聚糖CMCS加入到1.0%的乙酸溶液中，搅拌均匀得到1.0mgmL的CMCS溶液，取10.0mLCMCS溶液加入到RGO-Hemin溶液中，超声破碎，得到1.0mgmL的RGO-CMCS-Hemin溶液；（4）还原氧化石墨烯-羧甲基壳聚糖-氯化血红素纳米钯RGO-CMCS-HeminPdNPs复合材料的制备：将2.0mL浓度为20.0mmolL的六氯钯酸钠溶液和10.0mgAA加入到10.0mL的RGO-CMCS-Hemin溶液中；搅拌16h后取出；转速8000rmin离心15min；离心完成后，用移液枪去掉上清液，刮取黑色沉淀，用超纯水洗涤并溶解，得到1.0mgmL的RGO-CMCS-HeminPdNPs溶液；步骤2：电极的修饰与生物传感界面的构建（1）将丝网印刷电极SPE浸入浓度为0.5molL的稀硫酸溶液中，通过电化学以0.4V~1.2V的电压范围循环扫描20圈；（2）将活化后的SPE电极浸入持续搅拌的5.0mL质量分数为0.01%的HAuCl4溶液中，通过电化学在-0.5V电位下进行恒电位电沉积2min，得到AuNPsSPE；（3）将RGO-CMCS-HeminPdNPs悬浊液滴加在AuNPsSPE表面，在25°C恒温条件下孵育2h，洗涤干燥，得到RGO-CMCS-HeminPdNPsAuNPsSPE；（4）将GP3Apt滴加在RGO-CMCS-HeminPdNPsAuNPsSPE的表面，在25°C恒温条件下孵育1h，用质量分数为0.5%的BSA封闭，洗涤、干燥，得到生物传感界面GPC3AptRGO-CMCS-HeminPdNPsAuNPsSPE；步骤3：GPC3工作曲线的绘制（1）将不同浓度的GPC3溶液滴加到所得的生物传感界面上，在25°C恒温条件下孵育30min，洗涤、干燥，得到GPC3GPC3AptRGO-CMCS-HeminPdNPsAuNPsSPE工作电极；（2）将所得到的工作电极浸入0.2molL的PBS缓冲溶液中，采用DPV扫描，扫描范围为0.2V~1.0V，扫描速率为0.01Vs；记录电流响应峰值；（3）根据响应电流峰值与GPC3空白组响应电流峰值的差值与GPC3浓度之间的关系，绘制工作曲线，所得线性方程为Y=0.0551X+0.7297，计算出最低检测限度为9.898ngmL；步骤4：实际样品中GPC3的检测（1）将实际血清样本与GPC3混合均匀滴加到步骤2所得的生物传感界面上，在25°C恒温条件下孵育30min后得到工作电极；（2）将所得工作电极浸入到0.2molL的PBS缓冲溶液中，采用电化学工作站的DPV进行扫描，扫描范围为0.2V~1.0V，扫描速率为0.01Vs，记录传感器的响应电流值；（3）根据步骤3所得到的工作曲线的线性回归方程，计算得到所述待测实际样品中GPC3的浓度。

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