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申请/专利权人：南京师范大学
摘要：本发明公开了一种利用DNA折纸技术组装合成虾青素的方法，包括以下步骤：合成虾青素关键酶的重组质粒的构建及表达；不同边长的Y‑DNA折纸结构的制备；级联酶‑Y形DNA复合物的组装；将级联酶‑Y形DNA复合物构建虾青素合成体系制备虾青素。本发明以虾青素的多酶级联反应为研究对象，首次将DNA折纸技术应用于虾青素的多酶级联反应中，对虾青素合成关键酶（GGPPS、PSY、PDS、CRTW和CRTZ）进行空间上的自组装，利用DNA折纸结构来控制反应中底物和中间产物的局部浓度，从而优化反应条件和提高产物收率。实现了多酶体系的精准定位和定向化合成，提高了多酶催化效率，实现了虾青素的高效合成。
主权项：1.一种利用DNA折纸技术组装合成虾青素的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）合成虾青素关键酶的重组质粒的构建及表达：分别将基因片段crtE、crtB、crtI、crtW和crtZ与原核表达载体进行双酶切，使用DNA连接酶进行连接，获得重组质粒，将重组质粒分别导入大肠杆菌中进行诱导表达得到对应的重组蛋白GGPPS、PSY、PDS、CRTW和CRTZ；（2）不同边长的Y-DNA折纸结构的制备：分别取不同边长的DNA链与TAE-Mg2+缓冲液进行混合，混匀后放在PCR仪中退火组装，反应结束后，将溶液转移到超滤管中，离心多次，再将超滤管内柱翻转置于干净的外管中，离心得到纯化后的Y-DNA折纸结构，进行紫外定量即得不同边长纯化后的Y-DNA折纸结构；（3）级联酶-Y形DNA复合物的组装：首先将经巯基修饰的DNA锚链与步骤（1）中制备得到的虾青素合成途径中关键酶的结合得到酶-DNA复合物，然后将酶-DNA复合物分别与Y-DNA折纸结构混合然后经过退火反应得到级联酶-Y形DNA复合物；（4）将步骤（3）的级联酶-Y形DNA复合物构建虾青素合成体系制备虾青素。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京师范大学 一种利用DNA折纸技术组装合成虾青素的方法
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