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申请/专利权人：山东恒鲁生物科技有限公司
摘要：本发明涉及一种利用酵母基因工程高产乳糖‑N‑二糖的方法。本发明的技术方案是：一种乳糖‑N‑二糖（LNB）的制备方法，包括：a反应液中含有酵母基因工程菌株；b以N‑乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）与乳糖和或半乳糖为反应底物。本发明成功构建了基因修饰的乳酸克鲁维酵母基因工程菌和马克斯克鲁维酵母基因工程菌菌株，且利用其以乳糖和或半乳糖与GlcNAc为底物快速高效合成了LNB，不仅简化了工艺，且缩短了制备路线，反应条件简单，通过使用廉价的乳糖为原料，无需额外添加昂贵的酶催化剂和ATP，节省了生产成本（包括时间成本与金钱成本）。
主权项：1.一种乳糖-N-二糖LNB的制备方法，其特征在于，该方法包括：a反应液中含有酵母基因工程菌株，所述酵母基因工程菌株，包含乳-N-二糖磷酸化酶LNBP基因、半乳糖激酶基因，还包括对半乳糖-1-磷酸尿苷酰基转移酶标志物基因GalT的破坏，所述乳糖-N-二糖磷酸化酶Lacto-N-biosephosphorylase，LNBP，其氨基酸序列如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3所示，所述半乳糖激酶基因，包括内源的和或异源半乳糖激酶基因GALK，其氨基酸序列如SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6所示，所述标志物基因的氨基酸序列如SEQIDNO:7或SEQIDNO:8所示，b以N-乙酰氨基葡萄糖GlcNAc与乳糖，或N-乙酰氨基葡萄糖GlcNAc与葡萄糖和半乳糖为反应底物，反应体系中，所述N-乙酰氨基葡萄糖GlcNAc浓度为20-108mM，乳糖浓度为30-120mM或半乳糖浓度为50-350mM，葡萄糖浓度为50mM-400mM。
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