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申请/专利权人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所
摘要：本发明公开了一种分离辣椒果实原生质体的方法，包括取成熟期辣椒果实，将所述辣椒果实切片得到待分离果实薄片；将所述待分离果实薄片在25℃避光酶解，在摇床上摇动4-5h，加入W5溶液终止酶解反应并继续摇50-60min得到原生质体液，对酶解后的所述原生质体液进行过滤，将过滤后的所述原生质体液水平离心5min，去上清。在所述原生质体液加入MMG溶液，然后将其混匀后静置后得到分离后的原生质体。本发明提供的分离辣椒果实原生质体的方法，其具有操作简便，使用终止酶解反应提高了原生质体的游离效率，节省了成本；分离与纯化效果好，不同品种的辣椒果实原生质体都能够得到有效的分离。
主权项：1.一种分离辣椒果实原生质体的方法，其特征在于：包括如下步骤：A取成熟期辣椒果实，将所述辣椒果实切片得到待分离果实薄片；B将所述待分离果实薄片在25℃避光酶解，在摇床上摇动4-5小时，加入W5溶液终止酶解反应并继续摇50-60min得到原生质体液，所述酶解的溶液包括MES缓冲液，甘露醇，KCl，CaCl2，纤维素酶R10，离析酶R10，果胶酶；C对酶解后的所述原生质体液进行过滤，所述过滤的滤网为100μm，用W5溶液来洗涤剩余的残渣，经滤网过滤到离心管中，重复2-3次，用1mLW5溶液重悬，静置5min，吸取上清至装有9mLW5溶液的新离心管中，收集150-200g后水平离心5min，去上清；所述W5溶液配方为：2mMMES缓冲液，154mMNaCl，125mMCaCl2，5mMKCl；所述MMG溶液配方为：15mMMES缓冲液，0.4M甘露醇，15mMCaCl2；所述酶解的溶液配方为：10mMMES缓冲液，0.4M甘露醇，20mMKCl，10mMCaCl2，1.5％纤维素酶R10，0.5％离析酶R10，0.4％果胶酶；D将过滤后的原生质体液水平离心5min，去上清；E加入MMG溶液，然后将其混匀后静置得到分离的原生质体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 一种分离辣椒果实原生质体的方法
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