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申请/专利权人:中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
摘要:本发明公开了一种可视化快速检测莫尼茨绦虫的RPA‑LFD引物、探针、试剂盒及方法,本发明首次在莫尼茨绦虫M‑β‑tubulin基因GenBank:JN980967的第550bp~899bp位点设计出最佳引物和探针组合;建立的RPA‑LFD方法检测灵敏度高、特异性好,检测效果稳定,与牛羊常见肠道寄生虫,包括隐孢子虫、肝片吸虫、前后盘吸虫、日本血吸虫、鞭虫、古柏线虫、仰口线虫和捻转血矛线虫均无交叉反应;莫尼茨绦虫基因组最低检测限达100pgμL,标准质粒最低检测限达1.9×103copiesμL。30min内可完成检测,不需复杂特殊的仪器设备,耗时短,操作简单,快速准确,可实现现场或田间便携式可视化快速检测,在牛羊莫尼茨绦虫感染检测、个体化驱虫及综合防控方面具有很高的临床应用价值。
主权项:1.一种可视化快速检测莫尼茨绦虫的RPA-LFD引物和探针,其特征在于,所述RPA-LFD引物序列为:正向引物:5'-TCAACCGTGCCATCCCCAAAAGTATCCGACGTG-3'(SEQIDNo.1);反向引物:[5'-Biotin]-TAACTTCTATATGCTTGTGTATAACGGCTTGTTAA-3'(SEQIDNo.2);所述RPA-LFD探针序列为:[5'-6-FAM]-TCGTCGAGCCCTACAATGCCACGCTCTCTT[THF]CCACCAATTAATTGA-[3'-SpacerC3];所述引物和探针对应的特异性扩增片段位于M-β-tubulin基因与莫尼茨绦虫基因组的第325580bp~327027bp匹配的无gap重合区域的第550bp~899bp位点之间,大小为350bp,核苷酸序列如SEQIDNo.3所示,直接以待检样品DNA为模板进行靶基因扩增;所述M-β-tubulin基因的GenBank号为JN980967;所述莫尼茨绦虫基因组的GenBank号为JADFDV010000485.1。
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