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申请/专利权人：朱诺治疗学股份有限公司

摘要：本公开文本提供了用于将用于在细胞疗法中使用的T细胞如CD4+T细胞和或CD8+T细胞基因工程化的方法。在一些方面，所提供的方法包括用于以下的一个或多个步骤：如以1:1的比率合并富集的CD4+和CD8+细胞，并且然后在刺激条件下孵育所述细胞，通过转导或转染将重组多肽引入所述细胞，和或在促进增殖和或扩增的条件下培育所述细胞。在一些方面，所提供的方法是高度成功地生产基因工程化T细胞的有效可靠手段。

主权项：1.一种用于生产工程化细胞组合物的体外方法，所述方法包括：a在刺激条件下孵育输入组合物，从而产生刺激组合物，其中：所述输入组合物包含在3:1与1:3之间的比率的CD4+与CD8+T细胞，并且其中所述输入组合物包含浓度在1x106个细胞mL与5x106个细胞mL之间的在100x106与500x106之间的CD4+和CD8+T细胞；其中所述输入组合物的T细胞是获自患有癌症的人受试者的原代T细胞；并且所述刺激条件包括刺激试剂的存在，所述刺激试剂包括特异性结合至CD3的一级药剂和特异性结合至CD28的二级药剂；和b将重组受体引入所述刺激组合物的T细胞，从而产生工程化细胞组合物，所述重组受体是嵌合抗原受体CAR，其中所述孵育和引入各自在第一无血清培养基中进行，所述第一无血清培养基包含0.5mM至5mML-谷氨酰胺、0.5mM至5mML-丙氨酰-L-谷氨酰胺、在50IUmL和500IUmL之间的重组IL-2、在100IUmL和2,000IUmL之间的重组IL-7、以及在50IUmL和500IUmL之间的重组IL-15；所述引入在刺激条件下孵育开始后的2天内开始；所述引入包括将来自所述刺激组合物的在50x106与200x106之间的T细胞与包含编码所述CAR的多核苷酸的药剂接触；并且在所述引入过程中，来自所述刺激组合物的T细胞以在0.5x106个细胞mL与2x106个细胞mL之间的浓度培养；并且c在促进工程化T细胞扩增的条件下培育所述工程化细胞组合物，从而产生包含工程化T细胞的输出组合物，其中：所述培育在第二无血清培养基中进行，所述第二无血清培养基包含0.5mM至5mML-谷氨酰胺、0.5mM至5mML-丙氨酰-L-谷氨酰胺、在50IUmL和500IUmL之间的重组IL-2、在100IUmL和2,000IUmL之间的重组IL-7、以及在50IUmL和500IUmL之间的重组IL-15；所述培育在刺激条件下孵育开始后的3天内开始；所述培育在稳定的摇摆条件下进行；所述培育的至少部分是使用所述第二无血清培养基进行灌注；并且进行所述培育至少直至所述工程化细胞组合物包含至少2,000x106个活T细胞的阈值数量的活T细胞，其中所述阈值数量的活T细胞在孵育开始的9天内获得。

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