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申请/专利权人：浙江大学海南研究院
摘要：本发明公开了基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法，包括：选择gRNA靶位点；克隆含有gRNA的串联片段；连接各gRNA片段；对连接产物进行PCR扩增；纯化产物和目标载体的酶切；转化；农杆菌介导的水稻转基因；转基因植株的筛选与鉴定。选择gRNA靶位点具体包括如下步骤：根据CRISPR‑Cas9技术的靶位点设计原则；在靠近OsLEC1基因5’端的基因序列上设计2个gRNA靶位点。克隆含有gRNA的串联片段具体包括如下步骤：以质粒pGTR为模板。在本发明中，愈伤组织的分化直接影响了转基因的出苗效率，OsLEC1的敲除可以促进水稻愈伤组织的分化，提示它可能作为一个提高水稻乃至禾本科作物转化效率的一个重要靶标基因，可以以它为出发点来构建各种分子工具提高转化效率。
主权项：1.基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法，其特征在于，包括：S1、选择gRNA靶位点，靶位点的序列位于OsLEC1基因上，OsLEC1基因是文中记载的序列一；S2、克隆含有gRNA的串联片段；S3、连接各gRNA片段；S4、对连接产物进行PCR扩增；S5、纯化产物和目标载体的酶切；S6、转化；S7、农杆菌介导的水稻转基因；S8、转基因植株的筛选与鉴定。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江大学海南研究院 基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法
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